细胞工程是生物工程的一个重要方面，下面是细胞工程专项提升试题，请考生认真练习。

1.(2013课标Ⅱ,40,15分)甲、乙是染色体数目相同的两种二倍体药用植物,甲含有效成分A,乙含有效成分B。某研究小组拟培育同时含有A和B的新型药用植物。

回答下列问题:

(1)为了培育该新型药用植物,可取甲和乙的叶片,先用　　　　酶和　　　　酶去除细胞壁,获得具有活力的　　　　,再用化学诱导剂诱导二者融合。形成的融合细胞进一步培养形成　　　　组织,然后经过　　　　形成完整的杂种植株。这种培育技术称为　　　　　　　　。

(2)上述杂种植株属于多倍体,多倍体是指　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　。假设甲与乙有性杂交的后代是不育的,而上述杂种植株是可育的,造成这种差异的原因是　　　　　　　　　　　　　　　　　　。

(3)这种杂种植株可通过制作人工种子的方法来大量繁殖。经植物组织培养得到的　　　　　　　　　　等材料用人工薄膜包装后可得到人工种子。

2.(2014广东理综,29,16分)铁皮石斛是我国名贵中药,生物碱是其有效成分之一。应用组织培养技术培养铁皮石斛拟原球茎(简称PLBs,类似愈伤组织)生产生物碱的实验流程如下:

新生营养芽PLBsPLBs实验结果

在固体培养基上,PLBs的重量、生物碱含量随增殖培养时间的变化如图所示,请回答下列问题:

(1)选用新生营养芽为外植体的原因是　　　　　　　　　　　　　　　,诱导外植体形成PLBs的过程称　　　　。

(2)与黑暗条件下相比,PLBs在光照条件下生长的优势体现在　　　　　　　　　　　　,　　　　　　　　　　　　,　　　　　　　　　　　　。

(3)脱落酸(ABA)能提高生物碱含量,但会抑制PLBs的生长。若采用液体培养,推测添加适量的ABA可提高生物碱产量。同学们拟开展探究实验验证该推测,在设计实验方案时探讨了以下问题:

①ABA的浓度梯度设置和添加方式:设4个ABA处理组,1个空白对照组,3次重复。因ABA受热易分解,故一定浓度的无菌ABA母液应在各组液体培养基　　　　　　　　　　　　后按比例加入。

②实验进程和取样:实验50天完成,每10天取样,将样品(PLBs)称重(g/瓶)后再测定生物碱含量。如初始(第0天)数据已知,实验过程中还需测定的样品数为　　　　　　　　　　　　　　　　。

③依所测定数据确定适宜的ABA浓度和培养时间:当某3个样品(重复样)的　　　　时,其对应的ABA浓度为适宜浓度,对应的培养时间是适宜培养时间。

3.(2014课标Ⅰ,40,15分)某研究者用抗原(A)分别免疫3只同种小鼠(X、Y和Z),每只小鼠免疫5次,每次免疫一周后测定各小鼠血清抗体的效价(能检测出抗原抗体反应的血清最大稀释倍数),结果如下图所示。

若要制备杂交瘤细胞,需取免疫后小鼠的B淋巴细胞(染色体数目40条),并将该细胞与体外培养的小鼠骨髓瘤细胞(染色体数目60条)按一定比例加入试管中,再加入聚乙二醇诱导细胞融合,经筛选培养及抗体检测,得到不断分泌抗A抗体的杂交瘤细胞。

回答下列问题:

(1)制备融合所需的B淋巴细胞时,所用免疫小鼠的血清抗体效价需达到16 000以上,则小鼠最少需要经过　　　　次免疫后才能有符合要求的。达到要求后的X、Y、Z这3只免疫小鼠中,最适合用于制备B淋巴细胞的是　　　　小鼠,理由是　　　　　　　　　　　　　。

(2)细胞融合实验完成后,融合体系中除含有未融合的细胞和杂交瘤细胞外,可能还有　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　,体系中出现多种类型细胞的原因是　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　。

(3)杂交瘤细胞中有　　　　个细胞核,染色体数目最多是　　　　条。

(4)未融合的B淋巴细胞经多次传代培养后都不能存活,原因是　　　　　　　　　　　。

4.(2014福建理综,33,10分)Rag2基因缺失小鼠不能产生成熟的淋巴细胞。科研人员利用胚胎干细胞(ES细胞)对Rag2基因缺失小鼠进行基因治疗。其技术流程如图:

(1)步骤①中,在核移植前应去除卵母细胞的　　　　。

(2)步骤②中,重组胚胎培养到　　　期时,可从其内细胞团分离出ES细胞。

(3)步骤③中,需要构建含有Rag2基因的表达载体。可以根据Rag2基因的　　　　　　设计引物,利用PCR技术扩增Rag2基因片段。用HindⅢ和PstⅠ限制酶分别在片段两侧进行酶切获得Rag2基因片段。为将该片段直接连接到表达载体,所选择的表达载体上应具有　　　　　　酶的酶切位点。

(4)为检测Rag2基因的表达情况,可提取治疗后小鼠骨髓细胞的　　　　,用抗Rag2蛋白的抗体进行杂交实验。

5.(2013海南单科,31,15分)单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-1)可引起水泡性口唇炎。利用杂交瘤技术制备出抗HSV-1的单克隆抗体可快速检测HSV-1。

回答下列问题:

(1)在制备抗HSV-1的单克隆抗体的过程中,先给小鼠注射一种纯化的HSV-1蛋白,一段时间后,若小鼠血清中抗　　　　的抗体检测呈阳性,说明小鼠体内产生了　　　　反应,再从小鼠的　　　　中获取B淋巴细胞。将该B淋巴细胞与小鼠的　　　　细胞融合,再经过筛选、检测,最终可获得所需的杂交瘤细胞,该细胞具有的特点是　　　　　　　　　　　　。

(2)若要大量制备抗该蛋白的单克隆抗体,可将该杂交瘤细胞注射到小鼠的　　　　中使其增殖,再从　　　　中提取、纯化获得。

(3)通过上述方法得到的单克隆抗体可准确地识别这种HSV-1蛋白,其原因是该抗体具有　　　　　和　　　　　　等特性。