20.基因工程的操作步骤包括正确的操作顺序是

①目的基因与运载体结合将目的基因导入受体细胞目的基因的检测提取目的基因。

A.B.C.D.

第II卷(非选择题)

三、综合题(4x10=40) 21.工业生产上，获取天然β-胡萝卜素的方法有：①从植物中提取;②利用微生物的发酵生产。结合所学知识，请回答以下问题：?

(1)用组织培养的方法培育胡萝卜植株，过程如图：?

离体组织愈伤组织长出丛芽、生根移栽成活?

①A过程表示 ，B过程表示 。?

②培养过程中通常用的培养基为 。?

③培养基中需要添加的植物激素是 。

(2)若用微生物的发酵来获得β-胡萝卜素，首先需要通过 技术获得工程菌。发酵过程中应采用 技术来防止外来杂菌的入侵，保证发酵正常进行。

(3)在胡萝卜素的提取过程中，最理想的萃取剂是： ;萃取过程要采用 方法加热，而不用明火加热。

22.回答下列有关基因工程的问题(10分)

细菌、真菌等微生物产生的β-葡萄糖苷酶是一种耐热纤维素酶，可分解自然界中的纤维素获得能源。现可通过基因工程将β-葡萄糖苷酶基因(bglB基因)与图28的质粒重组并导入大肠杆菌获得大量有活性的β-葡萄糖苷酶。(质粒中ori为质粒复制所必需的DNA序列，启动子是使转录开始的一段DNA序列，终止子是提供转录终止信号的DNA序列，抗生素抗性基因为标记基因，其余为不同限制酶的酶切位点，切割形成的黏性末端均不相同)

(1).从高产β-葡萄糖苷酶的黑曲霉品种中提取到相应的RNA，进而获得bglB基因的DNA序列，这种获取目的基因的方法是____________________。

(2).为避免自身环化并确保bglB基因与图一质粒准确重组，可选用的限制酶是( )(2分)

A NdeI和XbaI B NdeI和BamHI

C XbaI D PstI E BamHI

(3).bglB基因通过 酶与质粒结合形成重组质粒。

(4).图二培养基中含有刚果红和纤维素，可用于筛选纤维素酶产量高的重组菌，原理如图三。

据此分析，图二中的[ ]菌落即为纤维素酶产量最高的菌株。

(5).在PCR扩增bglB基因的过程中，加入诱变剂可提高基因的突变率。与用诱变剂直接处理微生物相比，上述育种技术获得热稳定性高的bglB基因的效率更高，其原因是在PCR过程中( )(多选，2分)

A.仅针对bglB基因进行诱变

B.bglB基因产生了定向突变

C.bglB基因可快速累积突变

D.bglB基因突变不会导致酶的氨基酸数目改变

23.(1分)

(1)图中对良种奶牛进行处理时用到的激素是 ，①过程必须用到 酶，②过程使用的是 酶。③表示 技术，④表示基因工程中 过程;若方法C是最常用的将目的基因导入动物细胞的方法，则方法C

是 。

(2)如果转基因牛D的牛奶中含有 ，则说明血清蛋白基因在个体水平

已表达成功，其他细胞中不含血清蛋白是 的结果。

(3)图中A和B分别是指 和 。

(4)图中奶牛的牛粪可以用于生产沼气，沼气工程利用的是生态工程的 原理。

24.(10分)下图所示胡萝卜的韧皮部细胞通过无菌操作，接入试管后，在一定的条件下，形成试管苗的培育过程，请据图回答下列问题：

(1)_________和

_______两类植物激素。

(2)_____________，应用的技术是_____________，繁殖方式为

__________

(3)AB阶段主要进行的分裂方式是_______，B阶段除了细胞分裂外，还进行细胞

________等。

(4)______进行灭菌消毒，B阶段需要光照，原因是

_____________。

(5)________的结

果。

(6)____________________________________。(2分)

参考答案

1.C

【解析】在动物细胞培养过程中通行为表现定量的二氧化碳是为了维持溶液的pH。所以C选项错误。

2.A

【解析】A.胰岛素基因哺乳动物的基因太多了，如果用鸟枪法成本太高，宜用反转录法。

【解析】Tcr基因的黏性末端是E1限制酶识别序列，不能与E2限制酶切割形成的黏性末端拼接。

4.D

【解析】

试题分析：质粒是一种独立于细菌拟核外的环状DNA分子，故A错。质粒表现含有1个至多个限制酶切割位点，和标记基因等，故B错。质粒载体是DNA，表达和复制遵循中心法则，故C错。作为载体的质粒常含有抗生素抗性基因，作为标记基因，共重组DNA的鉴定和性状，故D正确。

考点：本题考查基因工程载体相关知识，意在考查考生能理解所学知识的要点，把握知识间的内在联系能力。

5.A

【解析】

6.A

【解析】

试题分析：病毒可作运载体(如噬菌体)，也可促使动物体细胞融合(如灭活的仙台病毒)，A正确;秋水仙素能使染色体数目加倍、质粒可作为基因工程的运载体、聚乙二醇促进细胞融合。

考点：本题考查基因工程和细胞工程的相关知识，意在考查考生能理解所学知识的要点，把握知识间的内在联系，形成知识的网络结构的能力。

7.B

【解析】胚胎干细胞是早期胚胎(原肠胚期之前囊胚)或原始性腺中分离出来的一类细胞，它具有体外培养无限增殖、自我更新和多向分化的特性。胚胎干细胞是一种高度未分化细胞它具有发育的全能性。无论在体外还是体内环境，胚胎干细胞都能被诱导分化为机体几乎所有的细胞类型，能分化出成体动物的所有组织和器官，包括生殖细胞。研究和利用ES细胞是当前生物工程领域的核心问题之一。

【解析】

试题分析：初级精母细胞从初情期直到生殖机能衰退都可发生，初级卵母细胞是在雌性胎儿期发生的，A错误。初级精母MI和MII的时间连续MI是在排卵前后完成的，MII是在精卵结合的过程中完成的，是不连续的，B错误。精子的形成需要变形，卵细胞的形成不需要变形，C错误。成熟生殖细胞，无论是精子还是卵细胞，染色体数量都是体细胞的一半，数量相同，D正确。

考点：本题考查动物胚胎发育的基本过程，意在考查考生理解所学知识的要点，把握知识间的内在联系

9.

【解析】基因工程运载体工具酶

10.D

【解析】本题考查基因工程。运载体上的抗性基因作为标记基因检测目的基因是否导入受体细胞。

11.A

【解析】无论亲本有无生殖隔离，采用体细胞杂交的方法都可以实现细胞融合，所以A选项是体细胞杂交时不必考虑的。