【考点定位】本题考查克隆技术，属于对识记、理解层次的考查。2013届天津市蓟县一中高三第一次月考2013届江西省上饶县中学高三第一次月考2013届广东省连州市连州中学高三月考。2013届黑龙江省大庆铁人中学高三第二次阶段考试2013届山东省青岛二中高三阶段性测试

(1)过程①所需要的酶是　　　　　。

(2)在构建基因表达载体过程中，应用限制性核酸内切酶 　切割质粒，用限制性核酸内切酶 　 切割目的基因。用限制酶切割目的基因和运载体后形成的黏性末端通过___________ 原则进行连接。人的基因之所以能与大肠杆菌的DNA分子进行重组，原因是 　　　 。

(3)在过程③一般将受体大肠杆菌用_________处理，以增大　　　　　的通透性，使含有目的基因的重组质粒容易进入受体细胞。

(4)将得到的大肠杆菌B涂布在一个含有氨苄青霉素的培养基上得到如下图a的结果(黑点表示菌落)，能够生长的细菌中已导入了 ，反之则没有导入;再将灭菌绒布按到培养基a上，使绒布表面沾上菌落，然后将绒布按到含四环素的培养基上培养，得到如图b的结果(空圈表示与a对照无菌落的位置)。与图b空圈相对应的图a中的菌落表现型是 ，这些细菌中导入了________________。

(5)人体的生长激素基因能在细菌体内成功表达是因为 。写出目的基因导入细菌中表达的过程 。

【答案】(1)逆转录酶　　(2)I　　II 　碱基互补配对　　人的基因与大肠杆菌DNA双螺旋结构相同　　(3)CaCl2　 细胞壁　　(4)普通质粒或重组质粒 　抗氨苄青霉素和四环素抗性　　重组质粒　　(5)共用一套密码子 生长激素基因——>mRNA——>生长激素

【解析】本题考查基因操作过程相关知识。人的生长激素基因与大肠杆菌的DNA分子进行重组，说明人的基因与大肠杆菌DNA的双螺旋结构相同，即基因是生物遗传物质的结构和功能的基本单位。其目的基因能成功地在大肠杆菌中得以表达，则说明人和细菌等生物共用一套(遗传)密码子。其表达的过程是：人的生长激素基因，通过转录形成信使RNA;再通过翻译，形成人的生长激素。其场所在细菌体内，所用的核苷酸和氨基酸等原料均来自于细菌体内。目的基因的获取途径有三条，从图中可以明显地看出，是通过逆转录法这一人工合成法来获取的。根据限制酶的专一性特点，可知在构建基因表达载体过程中，应用限制酶Ⅰ切割质粒，用限制酶Ⅱ酶切割目的基因。将目的基因导入到细菌细胞中的方法是钙离子处理法，使其细胞壁通透性增强，便于将目的基因形成的重组DNA分子进入，在氨苄青霉素的培养基上能形成菌落的，说明导入了普通质粒或重组质粒，再在含有四环素的培养基上培养，得到如图b的结果(空圈表示与a对照无菌落的位置)。与图b空圈相对应的图a中的菌落表现型，形成菌落提是含有抗氨苄青霉素和四环素抗性，不能形成菌落的是含有重组质粒的细菌，目的基因在受体细胞内表达原因是共用一套完全相同的密码子，目的基因表达过程为生长激素基因——>mRNA——>生长激素。

【考点定位】本题考查基因工程的基本操作工具和过程，属于对识记、理解层次的考查。2013届河南省开封市高三第一次定位检测

(1)若图中GFP的M端伸出的核苷酸的碱基序列是—TCGA—，N端伸出的核苷酸的碱基序列是—TGCA—，则在构建含该GFP的重组质粒A时，应选用的限制酶是__________。③过程需要的酶是__________。

(2)④过程将基因表达载体导入猪胎儿成纤维细胞常用的方法是__________。

(3)检测GFP是否已重组到猪胎儿成纤维细胞的染色体DNA上，可采用__________技术进行检测。

(4)用显微镜可观察到用于⑥过程的猪卵母细胞的卵黄膜和透明带之间有__________个极体。用于⑤过程的猪胎儿成纤维细胞，一般选用传代10代以内的细胞，原因是__________。

(5)由⑦过程获得的重组细胞培育成绿色荧光转基因克隆猪，涉及到的现代生物技术手段有__________。

(6)为了加快繁殖速度，可采用胚胎分割的方法。若对⑧过程得到的囊胚阶段胚胎进行分割，要注意__________。得到绿色荧光转基因克隆猪(雌性)之后，可用______

____处理，使之超数排卵，提高其繁育能力。