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2014-05-12
1.1 供试材料
195份以津强5号作为轮回亲本与矮败小麦回交2次的高世代品系,2009年种植于天津市武清区周庄村,每区2行,行长2 m,行距30 cm,5 cm点播。对其中9份农艺性状优良的非7OE亚基和6份含7OE亚基材料于2010年进行进一步扩繁,分析其揉混特性。
1.2 基因组提取
采用SDS法提取小麦基因组DNA。每份材料分别提取二粒种子的DNA,利用紫外分光光度计检测DNA浓度,终浓度调整至20 ng·μL-1。
1.3 STS标记检测
利用Ragupathy等开发的显性STS标记检测Bx7OE基因。引物由天津润泰科技发展有限公司合成。
标记(重复片段与逆转座子左边结合引物):TaBAC1215C06-F517:5‘-ACGTGTCCAAGCTTTGGTTC-3‘,
TaBAC1215C06-R964:5‘-GATTGGTGGGTGGATACAGG-3‘;
PCR反应体系为20 μL,含10×PCR Buffer 2 μL,d NTP(A、T、C、G)各200 μmol·L-1,每条引物1 μL (10 mmol·L-1),Taq DNA聚合酶(Takara)1 U,模板DNA 50 ng。标记1的PCR反应程序为:94 ℃变性5 min;94 ℃变性30 s,63 ℃退火30 s,72 ℃延伸1 min,35个循环;72 ℃延伸5 min。
PCR扩增产物以1.5%的琼脂糖凝胶电泳分离检测,缓冲液体系为1×TAE溶液,180 V电压电泳30 min,溴化乙锭染色后,用Gel Doc XR System扫描成像并存入计算机。
1.4 制粉方法
采用德国Brabender senior试验磨按AACC26-21A方法制粉。
1.5 揉混特性检测
由美国National公司生产的揉混仪采用10 g揉面钵按AACC54-40A方法测试,重复2次,取平均值。
1.6 统计方法
采用DPS统计分析软件进行显着性比较。
2 结果与分析
标签:农林学论文
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