细叶杜香(Ledum palustre L. Var. Angustum E. Busch)是杜鹃花科杜香属常绿直立小灌木，笔者曾报道从细叶杜香嫩枝和叶水提物的乙酸乙酯部位分离并鉴定了4个化合物：七叶内酯，对羟基苯甲酸，槲皮素和金丝桃苷[1]。本文报道从该水提物的石油醚和三氯甲烷部位共分离得到6个单体化合物，确定了其中5个化合物的结构，分别为5-羟基-4′,7-二甲氧基黄酮(1)、正二十八烷醇(2)、东莨菪内酯(3)、oleuropeic acid(4)、秦皮素(5)，化合物2和4为首次从该属植物中分离得到。

1 仪器、试剂与材料

熔点用X-4数字显示显微熔点测定仪测定(温度计未校正);紫外光谱扫描用岛津UV-2450紫外分光光谱仪;红外光谱用5DX-FT型红外光谱仪测定;质谱用Agilent6120型液相色谱-质谱联用仪测定，核磁共振用Bruker AV超导核磁共振波谱仪测定,柱层析和薄层层析硅胶均由青岛海洋化工厂生产。薄层色谱检测用254 nm、365 nm紫外灯。石油醚(60～90 ℃)、三氯甲烷、乙酸乙酯、甲醇均为分析纯。药材于2005年6月采自内蒙古大兴安岭,经广东药学院中药学院刘基柱老师鉴定为细叶杜香(Ledum palustre L.Var.Angustum E. Busch),样品现保存于广东药学院天然药物化学教研室。

2 提取与分离

干燥的细叶杜香嫩枝和叶(5.8 kg)粉碎后，用水回流提取6次(首次5 h，收集挥发油，其余每次2 h),合并提取液减压浓缩,浓缩液加醇沉淀,过滤,合并滤液浓缩至4 L,依次用石油醚,三氯甲烷萃取，得到石油醚部位3.8 g和三氯甲烷部位40 g。

石油醚部位(3.8 g)经硅胶(200～300目)柱层析，石油醚-乙酸乙酯梯度洗脱，每150 mL收集一个流分，TLC检测，合并相同流分。在第21～30流分析出黄色絮状沉淀，过滤，沉淀用石油醚-乙酸乙酯(体积比20∶1)重结晶，得化合物1(7 mg)。

三氯甲烷部位萃取物(40 g)经硅胶柱层析，石油醚-乙酸乙酯梯度洗脱，每800 mL收集一个流分，TLC检测。其中，石油醚-乙酸乙酯(体积比100∶3)洗脱部分，第113～136流分合并后浓缩，静置，析出白色颗粒状结晶，用三氯甲烷反复重结晶得化合物2(10 mg)。石油醚-乙酸乙酯(体积比5∶1)洗脱部分，其中第427～442流分浓缩液合并后，静置，溶液中析出无色透明长针状晶体，滤出结晶，用丙酮-甲醇(体积比1∶1)反复重结晶，再过LH-20凝胶柱进行纯化，甲醇为洗脱剂，根据色带收集并结合薄层检测合并相同流分，放置析晶，得到化合物3(30 mg);第451～466流分合并后，析出大量淡黄白色方晶，抽滤，用乙酸乙酯洗涤，沉淀变为纯白细颗粒状，经甲醇反复重结晶，得化合物4(150 mg);第535～552流分析出大量的淡黄色絮状沉淀，过滤，用石油醚和乙酸乙酯重结晶得到颜色不均一的黄色鳞片状晶体，复用甲醇和水溶解晶体并制成高温下的饱和溶液，然后放置冰箱，数小时即析出土黄色透明鳞片状结晶，再次过滤，用甲醇和丙酮加热溶解晶体后室温放置，数天后析出黄色针状结晶，再用甲醇进行重结晶得化合物5(50 mg)。

3 结构鉴定

化合物1：黄色粉末(CHCl3),mp170～172 ℃。薄层色谱展开可见明显黄色斑点。UV λmax/nm：269,326(MeOH);269,326(NaOMe);269,326(NaOMe,5 min);279,300,340 (AlCl3);202,279,300,340(AlCl3/HCl);270,329(NaOAc);268,331(NaOAc/H3BO3);紫外光谱显示可能含有3-或5-OH。IR (KBr) cm-1：3242(-OH),1656(C=O),1622,1593,1575,1489(Ar),1442,1355,1288,1211,1140,1008,830。1H-NMR(CDCl3，500 MHz) δ： 12.81(1H,s,C5-OH),7.84(2H,d,J=9.5 Hz,H-2′,6′),7.02(2H,d,J=9.5 Hz,H-3′,5′),6.58(1H,s,H-3), 6.48(1H,d,J

=2.0Hz,H-6),6.36(1H,d,J=2.0Hz,H-8),3.89(3H,s,7-OCH3),3.88(3H,s,4′-OCH3)。以上数据与文献[2] 报道的5-羟基-4′,7-二甲氧基黄酮基本一致，确定化合物1为5-羟基-4′,7-二甲氧基黄酮。

化合物2：白色颗粒状结晶(CHCl3),mp75～77 ℃。紫外无吸收。10%硫酸乙醇显紫红色斑点。IR (KBr) cm-1：3313(-OH),2918,2850(-CH2),1464,1380(-CH3),1061,720，红外光谱具备长链脂肪醇的特征吸收。1H-NMR (CDCl3，400 MHz) δ： 3.64(2H,t,J=6.8 Hz,-CH2OH),1.25～1.36 (br.s,n×CH2),0.82～0.98 (3H,m,-CH3)。13C-NMR (CDCl3,100 MHz)：63.1为直接与羟基相连的亚甲基碳信号,32.8为羟基β位的亚甲基碳信号。31.9～22.7为一系列的亚甲基碳信号,14.1为末端甲基信号。以上数据与文献[3]报道的正二十八烷醇一致，故确定化合物2为正二十八烷醇。

化合物3：淡黄色针晶(MeOH),mp206～208 ℃。在紫外365 nm下显强烈蓝色荧光推测可能为香豆素类化合物。UV λmax/nm：228，253，298，347(MeOH);240，391(NaOMe);228，253，297，345 (AlCl3);228，253，297，345(AlCl3/HCl);226,297,348 (NaOAc);226，297，346 (NaOAc/H3BO3);由紫外光谱中因加入乙酸钠使吸收峰产生红移且强度增加判断为4，5或7-羟基香豆素。IR (KBr) cm-1：3337(-OH),1703(C=O),1608,1565,1511(Ar),1290,1262,1139,922,861,591。1H-NMR(Acetone-d6，500 MHz) δ： 8.71(1H,s,-OH),7.84(1H,d,J=9.5 Hz,H-4), 7.20(1H,s,H-5),6.80(1H,s,H-8),6.17 (1H,d,J=9.5 Hz,H-3), 3.91(3H,s,6-OCH3) 。13C-NMR (Acetone-d6,125 MHz)：161.2(C-2),112.1(C-3),144.6(C-4),109.9(C-5),145.9 (C-6),151.8(C-7),103.7(C-8),151.1(C-9),113.3(C-10)。以上数据与文献[4,5]报道的东莨菪内酯基本一致，因此确定化合物3为东莨菪内酯。

化合物4：白色透明方晶(MeOH),mp158～160 ℃。10%硫酸乙醇显紫色斑点。UV λmaxnm：202(MeOH),203(NaOMe),提示分子中有共轭双键。ESI-MS给出分子量为184。IR (KBr) cm-1：3312(-OH),3000～2500(br.),1680(C=O),1649(C=C),1395,1369(i-pr),1260,1148。1H-NMR (DMSO-d6，400 MHz) δ： 11.97(1H,s,-COOH),6.85(1H,t,J=2.4 Hz,-CH2-CH=C-COOH), 4.09(1H,s,-OH)，1.05(6H,s,Me2C-O)，1.07～2.38 (7H,m,H-3,H-4,H-5,H-6)。13C-NMR (DMSO-d6,100 MHz)：130.2(C-1),139.1(C-2),23.0(C-3),43.8(C-4),24.9(C-5),27.0 (C-6),70.2(C-7),27.0(C-8),26.5(C-9),168.1(COOH)。以上数据与文献[6,7]所报道的oleuropeic acid基本一致，故确定化合物4为oleuropeic acid。

化合物5：黄色针晶(MeOH),mp232～234℃。其聚酰胺薄层斑点在紫外灯下呈黄绿色荧光，喷1%醋酸镁甲醇溶液后呈棕黄色。UV λmax/nm：274,354 (MeOH);273,383 (NaOMe);199,213,268,372(AlCl3); 203,338(AlCl3/HCl);205,273,372(NaOAc);205,357 (NaOAc/H3BO3);紫外光谱显示含邻二酚羟基。1H-NMR(Acetone-d6+DMSO-d6，400 MHz) δ ：9.49(1H,s,-OH),9.41(1H,s,-OH),7.88(1H,d,J=9.2 Hz,H-4),6.80(1H,s,H-5),6.21(1H,d,J=9.2 Hz,H-3),3.83(3H,s,6-OCH3) 。 氢谱数据和文献[8]报道的秦皮素一致，故确定化合物5为秦皮素。