陈皮是芸香科植物橘Citus reticulata Blanco及其栽培变种的干燥成熟果皮，药材分为“陈皮”和“广陈皮”。“广陈皮”为茶枝柑Citus reticulata ‘Chachi’的干燥成熟果皮，主产于广东新会，是广东十大道地药材之一。据报道陈皮的有效成分为黄酮类化合物和挥发油，具有抗衰老、软化心血管、减轻实验动物的动脉粥样硬化等功效[1-4]。影响陈皮总黄酮提取的因素很多，本文选择乙醇体积分数，提取温度，提取时间，液固比和提取次数进行单因素试验，在此基础上采用正交试验，优选得到新会陈皮总黄酮提取的最佳工艺。

1 材料与仪器

TU-1810紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器有限责任公司)，旋转蒸发器 (上海亚荣生化仪器厂)，恒温水浴锅，索氏抽提器等。

样品由新会陈皮协会提供，并由广东药学院中药鉴定教研室李书渊教授鉴定为茶枝柑Citus Reticulata Chachi的干燥成熟果皮。样品粉碎成粗粉，置干燥箱于60 ℃烘12 h以上。于闭光、阴凉处存放。橙皮苷(购自中国药品生物制品检定所，批号110712-200512)，其他试剂为分析纯。

2 方法与结果

2.1 陈皮总黄酮的提取

称取约5 g陈皮粗粉置250 mL烧瓶中，加入石油醚(30～60 ℃)80 mL，60 ℃回流脱脂2 h;挥干石油醚后，根据实验要求，按照不同的水提取温度、提取时间以不同液固比及提取次数进行提取，抽滤，洗涤滤渣，合并滤液和洗液，浓缩去适量的乙醇，然后转入100 mL量瓶中，定容，摇匀，即为供试品溶液。

2.2 橙皮苷标准曲线的绘制

取0.2274 mg/mL的橙皮苷对照品贮备液，精密吸取0.5、1、1.5、2.0和2.5 mL置25 mL量瓶中，加体积分数为60%的乙醇至刻度。在285 nm处测定吸收度,并绘制标准曲线。结果表明：在4.548～22.74 μg/mL范围内有良好的线性关系，回归方程为A=0.033C+0.013，r=0.9993。

2.3 测定方法

取一定提取条件下所得的供试品溶液，适当稀释，在285 nm处测定样品的吸光度。根据标准曲线计算总黄酮的含量。以陈皮总黄酮的得率(%)为指标，确定最佳提取条件。

2.4 单因素试验

选取水浴温度、乙醇体积分数、提取时间、液固比、提取次数这5个可能影响提取效果的因素做单因素试验，以确定相关因素对陈皮提取物中黄酮含量的影响，结果见图1。

A.提取温度; B.乙醇体积; C.提取时间; D.液固比; E.提取次数　图1 5种因素对陈皮总黄酮得率的影响(略)

Fig.1 Effect of five factors on the yield of total flavonoids

由图1可以得出：在70 ℃时陈皮总黄酮得率达到最大，故可以确定最佳的提取温度为70 ℃;乙醇体积分数大于60%，陈皮总黄酮得率逐渐减少，故可以确定最佳的乙醇体积分数为60%;提取时间从2 h后得率增长不大，以5 h为最高;液固比在30倍后有显著减少，以25倍为最高;提取1次后得率增长不大，从节省成本和节省溶剂的角度，提取次数为1次。

2.5 正交试验设计优选最佳提取条件

通过单因素实验选取影响较大的三个因素：提取时间、提取温度和液固比，运用正交设计实验法，选用三因素三水平来确定陈皮总黄酮提取的最佳条件。实验结果见表1～3。

表1 实验因素水平表(略)

Tab.1 Factors and levels

从表2的直观分析可以看出，3个因素对总黄酮提取含量的

影响次序：液固比、提取温度、提取时间。

从表3的方差分析可以看出，液固比和提取温度对结果有显著性影响，提取时间对结果的影响不显著，从经济、省时的原则考虑，提取时间定为3 h。综合上面的因素，最佳提取工艺：体积分数为60%的乙醇，提取温度70 ℃，液固比1∶25，提取时间3 h，提取1次。

表2 L9(34)正交实验结果与直观分析(略)

Tab.2 Result of L9(34) orthogonal experiment and analysis

表3 L9(34)正交实验方差分析表(略)

Tab.3 ANOVA analysis of L9(34) orthogonal experiment

2.6 验证实验

按上述优化提取条件平行做3份样品，结果稳定，证明该方案可行。

3 讨论

3.1 测定陈皮中总黄酮时，文献大多采用芦丁为对照品和“NaNO2-AlNO3-NaOH”体系，使得吸收峰向高处移动，以减少干扰[5-6] 。但实际上陈皮总黄酮基本不含芦丁，络合后芦丁最大的吸收峰和陈皮总黄酮的吸收峰相差较大。本文用陈皮总黄酮的主要成分橙皮苷为标准品，直接测定。实验结果显示两者的最大吸收波长很接近。该方法简单，易操作，技术成熟，重现性好。

3.2 陈皮总黄酮主要为黄酮苷类，用乙醇提取较水提好，得率高，杂质少，有利于后续的分离，溶剂可回收，适于工业生产。