灵芝(Ganoderma lucidum(Leyss.ex Fr.)Kerst.)属担子菌亚门，层菌纲，非褶菌目，多孔菌科，灵芝属真菌，俗称灵芝草，主要成分为麦角甾醇、顺蓖麻酸及反丁烯二酸，此外尚含有氨基酸、葡萄糖、多糖类、树脂及甘露醇等[1].近年来国内外对灵芝的化学成分、药理作用及临床应用等方面进行了广泛的研究.研究结果表明，灵芝具有免疫调节、抗肿瘤、抗病毒、抗衰老、抗疲劳、降血糖、降血压、消炎和镇静催眠等药理作用[2].复方灵芝口服液是以灵芝为主要原料，配合药食两用的山楂和大枣，经过科学的提取及加工制备而成.本研究通过动物实验，探讨复方灵芝口服液改善睡眠功能的最佳配伍剂量.

1 材料与方法

1.1 材料 取昆明种小鼠140只，体重为18～22g，由延边大学医学部实验动物科提供.灵芝、大枣及山楂原液由吉林省延边原始林生态保健食品有限公司提供;戊巴比妥钠为上海行知化工厂产品;褪黑素为江苏常州医药技术开发公司产品.

1.2 复方灵芝口服液最佳组合剂量选择试验 最佳组合剂量筛选采用L9(34) 3个因素及3个水平设计正交试验，其因素及水平设计见表1.根据表1制备成9种不同配伍比例的复方灵芝溶液(表2).取90只小鼠，雌雄各半，随机分为9组，即对应复方灵芝的9种剂量组合，每组各为10只.每日灌胃给予小鼠相应复方灵芝溶液1次，剂量为10mL/kg,连续14d.末次灌胃15min后，腹腔注射45mg/kg戊巴比妥钠.以小鼠的翻正反射消失为指标，选择最佳剂量组合[2，3].表1 因素水平表 表2 复方灵芝剂量组合

1.3 复方灵芝口服液改善睡眠的实验 根据正交试验结果,将原液按最佳组合剂量组合后，配制成3种剂量，即高、中、低剂量(分别相当于人体推荐量的20、10、5倍)[4～6].取50只小鼠，雌雄各半，随机分为5个组，即空白对照组、褪黑素组、复方灵芝口服液大、中、小剂量组，每组各为10只.每日分别灌胃给予复方灵芝口服液大、中、小剂量组小鼠220、110、55mg/kg复方灵芝溶液;灌胃给予空白对照组小鼠等体积生理盐水;灌胃给予褪黑素组小鼠1mg/kg褪黑素脑白金溶液;连续21d.末次给药15min后，腹腔注射60mg/kg戊巴比妥钠.以小鼠体重及翻正反射消失对小鼠体重及睡眠时间的影响为指标，观察复方灵芝口服液对小鼠体重及睡眠时间的影响.数据的统计学处理采用SPSS11.0统计软件进行方差分析. 2 结果

2.1 复方灵芝口服液的最佳剂量组合方案 睡眠潜伏期正交试验结果示，复方灵芝口服液最佳配方为灵芝取第3水平(P<0.01)，山楂取第1水平(P<0.01)，大枣取任意水平(P>0.05);睡眠时间正交试验结果示，复方灵芝口服液的最佳配方为灵芝取第2水平(P<0.01)，大枣取第3水平(P<0.01)，山楂取任意水平(P>0.05).由上述2个正交试验结果得出，复方灵芝口服液的最佳配方为灵芝取3或2水平，大枣取3水平，山楂取1水平.

2.2 复方灵芝口服液改善睡眠实验 各剂量组小鼠实验前后体重与空白对照组比较均无显著性差异(P>0.05)，提示复方灵芝口服液对小鼠体重无影响，见表3;褪黑素

组、空白对照组、复方灵芝口服液大、中、小剂量组小鼠睡眠时间分别为(132.7±30.1)min，(92.0 ±28.2)min，(172.1±28.2)min，(148.8±26.9)min，(120.1±28.2)min，各剂量组小鼠睡眠时间均较空白对照组小鼠明显延长，相比较均有显著性差异(P<0.01)，提示复方灵芝口服液具有显著延长戊巴比妥钠睡眠时间的作用.褪黑素组、空白对照组、复方灵芝口服液大、中、小剂量组小鼠睡眠潜伏期分别为(30.1±4.0)min，(34.6±5.9)min，(50.7±17.1)min，(35.7±12.0)min，(36.7±10.1)min，各剂量组小鼠睡眠潜伏期均无明显变化，与空白对照组比较均无显著性差异(P>0.05)，提示复方灵芝口服液对戊巴比妥钠睡眠潜伏期无明显的作用.表3 小鼠体重的变化情况

3 讨论

人类三分之一的时间在睡眠中度过，睡眠与健康的关系逐渐受到关注.随着现代化进程的推进，社会竞争日益激烈，生活方式亦发生变化，造成失眠症的发病率不断升高.长期失眠对人体的身心健康有害，易引发多脏器功能紊乱和免疫功能下降，且与溃疡病、高血压病、冠心病、糖尿病及其他精神疾病亦有一定的相关性.近年来，开发研制了多种改善睡眠的药物及保健品，虽然对睡眠改善作用是肯定的，但其中大部分含有动物激素，且有不良反应，故不宜长期使用[7，8].本实验采用正交试验，筛选出复方灵芝口服液的最佳配方为灵芝取120mL/L或80mL/L，大枣取180mL/L，山楂取60mL/L.本实验药理实验结果显示，复方灵芝口服液可显著延长小鼠戊巴比妥钠诱导的睡眠时间，但对其睡眠潜伏期无影响.综上所述，复方灵芝口服液具有改善小鼠睡眠的作用，其机制有待于进一步探讨.