1?4GCV杀伤敏感性及GCV工作浓度的确定[10]大鼠肝癌细胞CBRH7919/tk-和CBRH7919/tk+铺96孔培养板;在铺板24h后加入梯度浓度GCV，MTT法测定细胞对GCV的敏感性，确定GCV的工作浓度为39?2μmol/L。

1?5六味地黄丸含药血清和空白血清的制备及血清对细胞生长的影响[10]16只SD大鼠随机分为2组，空白血清组灌胃生理盐水，六味地黄丸含药血清组灌胃六味地黄丸(32g·kg-1·d-1)，制备4d和8d血清，-70℃冰箱保存备用。观测空白血清和含药血清对细胞生长的影响，结果表明血清能在一定程度上促进细胞增殖，但当血清浓度高于体积分数20%时细胞形态出现变化，故实验时采用对细胞生长影响较小的体积分数10%以下的血清浓度。

1?6自杀基因系统联合六味地黄丸含药血清对肝癌细胞的杀伤效应将大鼠肝癌细胞CBRH7919/tk+和CBRH7919/tk-按1∶9的细胞数混合，作为自杀基因tk/GCV系统作用的细胞;没有自杀基因系统的实验组，其作用细胞均为tk-细胞，按3×103个/孔铺96孔板，分为空白血清组、GCV加空白血清组、10%tk+/GCV加空白血清组、含药血清组、GCV加含药血清组及10%tk+/GCV联合含药血清组;灌胃8d含药血清又再分为低剂量组(2?5%含药血清+7?5%空白血清)、中剂量组(5%含药血清+5%空白血清)和高剂量组(10%含药血清)，共设12组，每组6个复孔;灌胃4d含药血清则分为低剂量组(5%含药血清+5%空白血清)和高剂量组(10%含药血清)，共设9组，每组6个复孔;血清浓度均为体积分数。用完全培养基培养24h后，加入相应空白血清和含药血清，孵育12h，再加入终浓度39?2μmol/L的GCV，培养60h后，以MTT法检测细胞活性。

1?7统计学分析和协同性分析采用SPSS 11?5统计软件，多组间两两比较用One?Way ANOVA,LSD法。协同性分析用金正均Q值法判断[13]，Q=实验联合药效R’(A+B)/理

论联合药效R(A+B)，理论联合药效R(A+B)=RA+RB-RA×RB，RA、RB为单独用药药效。Q<0?85则判断为拮抗作用;0?85≤Q<1?15则判断为相加作用;Q≥1?15则判断为协同作用。

2结果

2?1自杀基因系统联合六味地黄丸含药血清(4d)对肝癌细胞的杀伤效应空白血清组、含药血清组、GCV加空白血清组、GCV加含药血清组细胞均未显示明显的细胞毒性，表明在实验条件下血清和GCV对肿瘤细胞的生长无明显影响。自杀基因系统10%tk+/GCV加空白血清组及10%tk+/GCV联合不同浓度的含药血清组均具有显著杀伤作用(与空白血清组比较，P<0?05)，表明自杀基因系统具有生物学功能;10%tk+/GCV系统联合5%、10%含药血清组的细胞存活率均显著低于10%tk+/GCV加空白血清组(P<0?05或P<0?01)及相对应的含药血清组，联合组的实际抑制率均显著高于理论抑制率，Q值分别为1?16、1?49，均大于1?15，说明其相互作用具有协同性，且随着含药血清浓度的增高Q值增大，协同作用增强。结果见表1。

2?2自杀基因系统联合六味地黄丸含药血清(8d)对肝癌细胞的杀伤效应10%tk+/GCV自杀基因治疗系统联合2?5%、5%、10%浓度的含药血清，细胞存活率均显著低于含药血清组与10%tk+/GCV加空白血清组(P<0?05或P<0?01)。联合组的实际抑制率均显著高于理论抑制率，Q值分别为0?86、1?20、1?42。但2?5%的含药血清联合组的Q值在0?85~1?15之间，为相加作用;而5%、10%浓度联合组均Q>1?15，说明其增效作用具有协同性，且随着含药血清浓度的增高协同作用增加。结果见表2。表1自杀基因系统联合六味地黄丸含药血清(4d)对肝癌细胞的杀伤效应表2六味地黄丸含药血清(8d)联合10%tk+/GCV系统对CBRH7919作用的杀伤效应