分别精密吸取对照品溶液1,2,4，8,l0,l2,16,20uL进行色谱测定，按上述色谱条件测定峰面积，以对照品进样质量(X，ug)对峰面积(Y，mAu.Sec)进行线性回归，求得回归方程为：Y=1095.7X-1.4585，r=1，线性范围0.185ug～3.7ug。(见表2)

表2 白花前胡甲素标准曲线的测定

2.5 精密度试验

精密吸取对照品溶液10uL，连续进样6次，测得峰面积积分值。白花前胡甲素平均峰面积为2031.53，RSD为1.28%。结果表明仪器精密度良好。

2.6 稳定性试验

精密吸取同一供试品溶液10uL，于0，2，4，8，12 h进样测定。白花前胡甲素平均峰面积为1052.07，RSD为2.15%。表明供试品溶液在12h内稳定。 2.7 重复性试验

取同一批次样品(20080115)，按供试品溶液制备项下操作，平行制备6份，按上述色谱条件测定含量，结果白花前胡甲素平均含量为0.8012mg/ g，RSD为1.57%。结果表明本方法重复性良好。

2.8 加样回收率试验

同一批次已知含量的镇咳宁颗粒(20080115)适量，研细，取细粉约0.5g，精密称定，精密加入一定量的白花前胡甲素对照品，按供试品溶液制备项下操作，重复操作6份，按上述色谱条件测定含量，计算回收率，结果见表3。结果表明该方法具有良好的回收率。

表3 加样回收试验结果(n=6)

2.9 样品测定

精密称取镇咳宁颗粒0.5g，按样品制备方法制备供试品溶液，精密吸取供试品溶液注入液相色谱仪中，测定含量。共测定3批，结果见表4。

表4 镇咳宁颗粒含量测定结果(n=3)

3 讨论

3.1 供试品溶液制备方法曾考察提取方法(超声、回流)、提取溶剂(50%乙醇、80%乙醇、甲醇)、提取溶媒量(50倍量、100倍量、200倍量) 、提取时间(15min、30min、45 min)。加热回流与超声处理样品，两者提取的白花前胡甲素含量相差不大，从操作简便角度考虑，确定提取方法为超声提取;三种不同溶媒进行提取，白花前胡甲素含量无差异。80%乙醇提取液更为澄清，容易滤过，因此提取溶媒选用80%乙醇;溶媒用量为100倍量和200倍量时提取效果差异不大，均高于50倍量时的提取效果，因此选择溶媒用量为100倍量。超声处理30min与45min结果近似，略高于超声处理15min，因此选择样品超声处理30min。

3.2 本实验曾采用乙腈-水、甲醇-水等系统的不同梯度作为流动相，结果采用乙腈与水溶液梯度洗脱，分离效果好，重现性强。本测定方法可用于镇咳宁颗粒的质量控制。

参 考 文 献