实验数据采用SPSS 13.0 与PPMS 1.5[5]统计软件进行处理,统计方法采用方差分析。

2 结果

2.1 低剂量顺铂节律化疗对HUVECs和HepG2细胞的抑制作用

低剂量顺铂作用HUVECs细胞24、48、72 h,结果显示均具有抑制作用,且在一定的范围内呈现剂量和时间依赖性，低剂量顺铂组的吸光度值明显低于对照组,差异有显著性(F=14.57～285.44，q=3.50～7.63，P<0.05),当顺铂浓度达到750.0 μg/L时对内皮细胞增殖抑制作用达到饱和。相同条件下,低剂量顺铂对人HepG2细胞则未显示出抑制作用,低剂量顺铂组的吸光度值与对照组比较差异无统计学意义(F=0.71～1.18，P>0.05)。见表1。

2.2 流式细胞仪检测细胞周期变化

低剂量顺铂组处理HUVECs 细胞48 h 后,随顺铂浓度增大,G0/G1期细胞比例与对照组比较明显减少,差异有显著性(F=12.30,q=3.20～8.47,P<0.05);S期细胞比例明显增多,差异有显著性(F=6.44,q=3.18～6.04,P<0.05);G2/M期细胞比例变化不明显，差异无统计学意义(F=0.16,P>0.05)，且当顺铂浓度达到750.0 μg /L时作用达到饱和。低剂量顺铂组处理HepG2细胞48 h后与对照组比较,各期细胞比例无明显改变，差异无统计学意义(F=0.03～0.10，P>0.05)。见表2。

表1 不同浓度低剂量顺铂对HUVECs和HepG2细胞存活率的影响(略)

表2 不同浓度低剂量顺铂作用HUVECs和HepG2细胞 48 h细胞周期分布(略)

2.3 低剂量顺铂对CAM血管形成的影响

本文实验结果显示，低剂量顺铂节律化疗具有抑制CAM新生血管形成的作用。低剂量顺铂组与生理盐水对照组各取10个受精鸡胚，按上述方法分别加入不同浓度的顺铂及生理盐水，其抑制百分率分别为：顺铂7.5 μg/L组为(30.0±5.0)%，顺铂75.0 μg/L组为(40.0±4.0)%，顺铂750.0 μg/L组为(50.0±5.0)%，顺铂7 500.0 μg/L组为(50.0±4.0)%，生理盐水对照组为0%，低剂量顺铂组与生理盐水对照组比较有显著性差异(F=259.04,q=7.76～38.80,P<0.05)，且当顺铂浓度达到750.0 μg/L时作用达到饱和。

3 讨论

抗血管治疗作为抗肿瘤治疗研究的热点,仅有少数几种药物，如endostatin、TNP?470批准进入临床应用。近年来,国外研究发现，不少传统的细胞毒药物在低剂量(非细胞毒浓度)下表现出了抗血管生成的活性，这种新的化疗方式重新定义了治疗的作用靶位不是肿瘤细胞而是新生的血管内皮细胞。MILLER等[6]将此方法称为“抗血管生成方案”,并提出“重新确定化疗靶向” 的观点。有研究报道,50%的新生血管内皮细胞来自骨髓衍生的循环内皮祖细胞(CEPs),CEPs可以通过血管内皮生长因子(VEGF)从骨髓进入外周血循环,在那里它们迁移到血管生成区并分化成成熟的内皮细胞，抗血管生成化疗阻止血管修复的部分原因就在于化疗对CEPs的作用[7]。目前许多观点支持这一疗法，包括频率越高越好及剂量越小越好，在短间隔(如每2周1次)内给与一种或多种化疗药物的 “剂量密度”疗法已在Ⅲ期随机临床试验中显示出良好效果[8],其给药观念在某些方面与节律化疗相似;一些学者通过数学模型对这种给药模式进行研究分析发现，机体可通过抑制肿瘤新生血管生长，产生持久的抑瘤效果，比常规的最大耐受剂量化疗可能会更加延长病人的生存时间[9];DKLEMENT 等[10]的实验显示，活性增殖的内皮细胞较增殖的肿瘤细胞对化疗药物更敏感。低浓度的化疗药物长期持续使用，避免了常规化疗方案中内皮细胞在化疗间歇期的恢复，增加其抗血管生成效果，起到长期抑制肿瘤的作用[11]。低剂量节律化疗的优点为：①内皮细胞遗传性状稳定，不易产生耐药;②所需剂量小，无明显毒副作用;③血管靶向治疗不依赖实体瘤类型而异，抑瘤谱广;④药物易于到达靶细胞，具有高效性;⑤能与特异性抗血管生成药物合用，提高疗效[12]。因此，研究传统化疗药物的抗血管生成作用不仅具有重要的理论意义,同时也具有临床实际应用价值。 　　顺铂是一种细胞周期非特异性抗肿瘤药物，它通过与DNA链结合，抑制DNA、RNA合成和细胞有丝分裂，从而抑制肿瘤生长，该药已用于多种实体肿瘤的治疗，是目前较为有效的化疗药物之一。本实验分别挑选了体内、体外两种典型的实验方法探讨低剂量顺铂持续应用对血管形成的影响。实验结果表明，低剂量顺铂持续应用在体外可以抑制人血管内皮细胞的增殖,在体内可以抑制鸡胚尿囊膜血管的新生，抑制作用在7.5～750.0 μg/L 的浓度下呈剂量依赖性,当顺铂浓度达到750.0 μg/L时作用达到饱和。同时,在实验所选定的浓度下,低剂量顺铂在体外未能抑制肿瘤细胞的增殖。提示低剂量顺铂持续应用对新生肿瘤血管的抑制机制与其细胞毒作用不同,是在非细胞毒浓度下表现出的特殊能力,是抗癌机制的一个重要方面。

总之，低剂量节律化疗抗血管生成作用是近来提出的新观点，其前期临床试验具有可行性优势，但目前仍有许多挑战需要克服以提高临床用药的成功率。随着研究的深入，低剂量节律化疗有望成为晚期肿瘤姑息治疗的一种新选择，通过提高病人的生活质量，使之长期带瘤生存，使那些不易治愈的肿瘤成为可控性疾病。

【参考文献】