三、统计学方法
    采用SPSS11.0软件进行统计学分析,计数资料采用χ2检验。P<0.05为差异有统计学意义。
    1.免疫组化检测TMPRSS4蛋白在结肠直肠癌组织和正常肠上皮中表达标本免疫组化染色显示,TMPRSS4蛋白定位于细胞膜上,在肿瘤组织和转移淋巴结中均染色阳性,且转移淋巴结中TMPRSS4蛋白染色更强。表明TMPRSS4表达可能与肿瘤细胞迁移能力有一定相关性。
    2.半定量RT-PCR和Western印迹检测TMPRSS4在结肠癌细胞株中的表达通过半定量RT-PCR检测发现,TMPRSS4基因在7株结肠癌细胞中有不同程度的表达,其中在HT29、SW480、SW620、SW1116中的表达相对较高。Western印迹检测亦有类似结果,有细胞均不同程度表达TMPRSS4蛋白,而HCT116、SW480和SW1116蛋白表达量相对较高。因此,本研究决定选用SW480细胞进行下一步试验。三、siRNA瞬时转染后SW480细胞中TMPRSS4蛋白表达下调在转染siRNA48h后,Western印迹法检测发现,与空白对照组和NC组相比,siRNA干扰组(si组)的TMPRSS4蛋白表达明显下降。
    3.TMPRSS4下调可显着抑制SW480细胞的增殖能力siRNA处理SW480细胞株后,采用CCK-8法测定细胞增殖能力。在第1、2、3、4、5天不同时间点分别测定吸光度值,吸光度值可间接反映细胞增殖能力的强弱。与空白对照组和NC组相比,si组细胞增殖能力在48~96h时受到明显抑制(P<0.05)。
    4.下调TMPRSS4诱导SW480细胞凋亡SW480细胞株转染TMPRSS4siRNA后孵育48h,收集细胞,用AnnexinⅤ/PI双染色法检测细胞周期,si组细胞凋亡比值为14.0%,而空白对照组和NC组分别为10.4%和10.1%,有统计学差异(P<0.05)。提示下调TMPRSS4可能有诱导结肠癌细胞凋亡的作用。