1 试剂、仪器与实验动物

1.1 试剂与仪器

高效液相色谱仪(LC―10A，日本岛津)，智能透皮实验仪(TP―2A,南京红蓝电子科技中心)，改良Frans扩散池(购自沈阳药科大学)，ZD―85双功能气浴恒温振荡器(江苏金坛市富华仪器有限公司)，卡波姆940(Carbomer，美国Goodrich公司)，双氯芬酸钠(北京双鹤药业有限公司)，双氯芬酸钠对照品(购自中国药品生物制品检定所)，壬代环戊双醚(本室合成)，氮酮(azone，药用，广州化学助剂厂)，甲醇(色谱醇，南京汉邦试剂厂)，其他试剂均为分析纯。

1.2 实验动物

昆明种小白鼠，体质量20～22 g，SPF级，雌、雄兼用，福建医科大学动物实验中心提供，合格证号为医动字第23―006号(质)。

2 实验方法 1 双氯芬酸钠凝胶剂的制备

取双氯芬酸钠150 g溶解于60 ℃ 1 500 mL丙二醇中，另将150 g卡波姆940加入800 mL蒸馏水中充分溶胀，搅拌下将双氯芬酸钠溶液加入卡波姆基质中，并分别加入质量浓度为0%，0.5%，1.0%，1.5%，2.0%，25%，3.0%的壬代环戊双醚、2.0%的氮酮，用三乙胺调pH为7.5，搅拌使成凝胶状，蒸馏水加至1 000 g，搅匀，分装即得。 2 含量测定 2.1 色谱条件

色谱柱shimpack ODS柱(4.6 mm×150 mm，10 μm);检测波长284 nm;流动相：甲醇乙酸水溶液(pH调3.0)(体积比70∶30);流速：1.0 mL・min-1;柱温为室温;进样量：20 μL。柱效以双氯芬酸钠计，理论塔板数不低于3 000。 2.2 标准曲线的制备

精密称取105 ℃干燥至恒重的双氯芬酸钠对照品50 mg，置于50 mL量瓶中，用流动相溶解定容，振荡摇匀，备用。精密量取标准液0.5，1.0，1.5，2.0，2.5，3.0 mL置于100 mL量瓶中，用流动相溶解定容，振荡摇匀。精密吸取20 μL进高效液相仪测定峰面积，以峰面积(A)为纵坐标与双氯芬酸钠质量浓度(ρ)进行线性回归，得标准曲线方程： A=2377.15 ρ+01152，r=0.9998，线性范围：5.0～30.0 μg・mL-1。 2.3 稳定性试验

取双氯芬酸钠适量，加接收液生理盐水配成高低不同浓度的溶液，分别在0,2,4,8,12,24 h处测定峰面积，RSD分别为0.78%和0.61%。结果表明，双氯芬酸钠在24 h内稳定。 2.4 精密度试验

精密吸取对照品溶液(15.078 μg・ml-1)20 μL，分别于同一日内，不同日内重复进样5次，测得RSD分别为1.19%和2.13%。 3 体外透皮试验 3.1 离体鼠皮的制备

取体质量20～22 g健康小鼠，处死后立即剃除腹部毛，剥离腹部皮肤，除皮下脂肪，用生理盐水冲洗后浸泡于生理盐水中，置于4℃冰箱冷藏，24 h内使用。 3.2 体外透皮试验

试验装置的透皮面积为4.52 cm2，接受池体积为10.05 mL。磁力搅拌器速度为60 r/min，实验温度为(37±0.5) ℃恒温水浴。接受液为生理盐水。