1.2 仪器

　　P230高效液相色谱仪(大连依利特)，FC204分析天平(上海精科仪器厂)，电热恒温水浴锅(大连医疗器械厂)，PHS?25型pH计(上海精科雷磁)，DF?101磁力搅拌器(巩义市英峪予华仪器厂)，透析袋(美国VIKASE公司)，M?110L型微射流仪(美国microfluids公司)。

　　1.3 动物

　　小白鼠(18～22 g，沈阳药科大学实验动物中心，SCXK 辽2005-008);家兔(2～3 kg，沈阳药科大学实验动物中心，SCXK 辽2005—008);S180肿瘤(辽宁省肿瘤研究所)。

　　2 方法与结果

　　2.1 pH梯度法制备硫酸长春新碱脂质体及包封率测定[3]

　　2.1.1 HPLC条件

　　色谱柱：Kromasil C18(200 mm×4.6 mm,5 μm);流动相：甲醇?水?二乙胺(体积比70∶30∶0.5)(磷酸调pH7.0);柱温：35 ℃;流速：1.2 mL/min;紫外检测波长：298 nm。

　　2.1.2 空白脂质体的制备

　　将HSPC、Chol按2∶1(质量比)混合，加适量无水乙醇，65 ℃水浴中加热溶解，挥除乙醇，加枸橼酸缓冲液(0.3 mol/L，pH 4.30)，65 ℃水化30 min，用微射流仪循环数次，依次通过0.8和0.45 μm的微孔滤膜整粒，得空白脂质体。将HSPC、Chol、CHSPEG2000按2∶1∶0.2(质量比)混合，其他操作同上，得长循环空白脂质体。

　　2.1.3 硫酸长春新碱脂质体的制备

　　取空白脂质体0.2 mL、硫酸长春新碱溶液(1.0 g/L)1.0 mL和Na2HPO4溶液(0.375 mol/L;pH 9.0)0.8 mL混匀(pH 7.3)，于60 ℃孵化10 min，得硫酸长春新碱脂质体。取长循环空白脂质体同法操作，得长循环硫酸长春新碱脂质体。

　　1.4 硫酸长春新碱标准曲线制备

　　取硫酸长春新碱对照品储备液(0.1 g/L)，用70%(体积分数)甲醇配制成1.0，2.5，5.0，7.5，10.0，12.5 mg/L的系列溶液，滤过，HPLC测定;以峰面积(A)对质量浓度(ρ)线性回归，得回归方程A=14.5ρ+3.1(r=0.999 9)，线性范围1.0～12.5 mg/L。

　　2.1.5 硫酸长春新碱脂质体药物回收率测定

　　取0.8，1.0，1.2 g/L的硫酸长春新碱溶液各1 mL，分别加入空白脂质体0.2 mL和Na2HPO4溶液0.8 mL，制备不同浓度硫酸长春新碱脂质体。取各浓度脂质体各0.3 mL分别置于5 mL量瓶中，以去离子水定容，摇匀，再取1.5 mL于5 mL量瓶中，以甲醇定容，摇匀，滤过，HPLC法测定。代入标准曲线计算药物含量，进而计算回收率。结果表明，硫酸长春新碱脂质体中药物回收率为 98.1%～101.8%。