1.2 实验动物分组和模型建立

雄性SD大鼠60 只，7 周龄，体重190±20 g。适应性饲养1 周，随机分为正常组20 只和腺嘌呤组40只。腺嘌呤组每日腺嘌呤300 mg/kg灌胃，6 周后以代谢笼留取24 小时尿液，眶内静脉采血，测定24 小时尿蛋白定量、血尿素氮、血肌酐。检测发现全部造模成功。随机分为2 组：非治疗组20 只，治疗组20 只。治疗组大鼠每日给予黄葵胶囊[2 g/kg·d]灌胃，同时正常组和非治疗组给予等量生理盐水灌胃。4周后全部大鼠以代谢笼留取24 小时尿液，眶内静脉采血，测定24 小时尿蛋白定量、血尿素氮及肌酐。大鼠处死后取部分肾组织置于10%中性甲醛中固定，部分肾组织液氮保存用于蛋白印迹杂交方法(Western blot)检测蛋白表达。实验期间大鼠自由饮水、进食。

1.3 检测方法

1.3.1 尿蛋白定量及肾功能测定

1.3.2 病理形态学观察

肾组织经10%中性甲醛固定，梯度乙醇脱水、二甲苯透明、浸腊、包埋、切片，厚3 µm，行HE染色，观察肾小球硬化及肾间质纤维化的程度。

1.3.3 蛋白印记分析

各组取约100 mg肾组织置于1 ml裂解缓冲液(含蛋白酶抑制剂PMSF 100ug/ul，aprotinin 1 ug/ml，leupeptin 1 ug/ml)，匀浆后冰浴30 分钟，然后4 度12000 g离心20 分钟。提取蛋白后用BCA法测量蛋白浓度。取等量蛋白质进行SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，半干法转移至聚氟乙烯膜上，封闭液封闭，加入1：200稀释的 TGF-β1抗体，4 ℃过夜。0.05%TBST洗膜3 次，ECL显影。

1.4 统计学处理

计量资料采用均数±标准差表示，数据用SPSS 13.0软件包进行统计学处理。各组间均数比较采用单因素方差分析，P <0.05认为有统计学意义(方差齐时用LSD法、方差不齐时用Tamhane法)。

2 结果

2.1 尿蛋白定量变化

非治疗组和治疗组大鼠尿蛋白排泄明显高于正常组(P <0.01);治疗组大鼠尿蛋白定量与非治疗组比较有所降低(P <0.05)，见表1。