2.1 测定波长的选择

齐墩果酸与香草醛浓硫酸加热反应生成物在540 nm处显示最大吸收波长。由于合欢皮与山合欢皮所含皂苷均为三萜皂苷,且为齐墩果烷型[2],与香草醛浓硫酸加热反应生成物的最大吸收波长与齐墩果酸一致,故选定齐墩果酸为标准对照品,540 nm为测定波长。

2.2 供试品溶液的制备

合欢皮与山合欢皮粉碎过40目筛,60 ℃恒温烘2 h,置干燥器中备用。精密称取样品各2 g,置索氏提取器中,加甲醇适量,回流提取至无皂苷反应(约7 h),减压回收甲醇,用适量水溶解残渣,转移至分液漏斗中,乙醚脱脂,用水饱和的正丁醇萃取4次,合并正丁醇萃取液,减压回收正丁醇,残渣用少量甲醇溶解,过滤,滤液置10 mL容量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,作为供试品溶液。

2.3 对照品溶液的制备

精密称定干燥至恒重的齐墩果酸适量,用甲醇制成每1 mL含1.22 mg的溶液,作为对照品溶液。

2.4 标准曲线的制备

精密量取齐墩果酸对照品溶液20、40、60、80、100 μL,分别置于试管中,挥干;精密加入8%香草醛乙醇溶液0.5 mL和72%硫酸溶液5 mL,摇匀,置恒温水浴60 ℃加热10 min,取出试管,置冰水浴中冷却15 min。分别于540 nm处测吸收光度值。以吸光度值为纵坐标,取样量为横坐标绘制标准曲线。其回归方程为：Y=7.52×10-3X-0.024 4,r=0.999 3。

2.5 回收率测定

称取合欢皮样品2份,其中1份加齐墩果酸一定量,并依上法处理与测定,重复5次,其平均回收率为96.9%,RSD=1.69%,结果见表1。 表1 回收率试验结果(略)

2.6 样品含量的测定