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维生素C的测定
维生素C是一种已糖醛基酸,有抗坏血病的作用,所以被人们称做抗坏血酸,主要为还原型及脱氢型两种,广泛存在于植物组织中,新鲜的水果、蔬菜,特别是枣、辣椒、苦瓜、柿子叶、猕猴桃、柑橘等食品中含量较多。它是氧化还原酶之一,本身易被氧化,但在有些条件下又是一种抗氧化剂。
维生素C(还原型)纯品为白色无臭结晶,熔点190~192℃,溶于水或乙醇中,不溶于油剂。在水溶液中易被氧化,在碱性条件下易分解,在弱酸条件中较稳定,维生素C开始氧化为脱氢型抗坏血酸(有生理作用)。如果进一步水解则生成2,3-二酮古乐糖酸,失去生理作用。
根据它具有的还原性质可以测定维生素C的含量。常用的测定方法有
(1)2,6-二氯靛酚法 (还原型VC)
(2)2,4-二硝基苯肼法 (总VC)
(3)碘酸法
(4)碘量法
(5)荧光分光光度法
一、2,6-二氯靛酚滴定法
1、原理:
还原型抗坏血酸还原染料2,6-二氯靛酚,该染料在酸性中呈红色,被还原后红色消失。还原型抗坏血酸还原2,6-二氯靛酚后,本身被氧化成脱氢抗坏血酸。在没有杂质干扰时,一定量的样品提取液还原标准2,6-二氯靛酚的量与样品中所含维生素C的量成正比。
2、试剂
⑴ 1%草酸溶液:称取10g草酸,加水至1000ml;
⑵ 2%草酸溶液:称20g草酸,加水至1000ml;
⑶ 维生素C标准液:准确称20mgVC溶于1%草酸中,并稀释至100ml,吸5ml于50ml容量瓶中,加入1%草酸至刻度,此溶液每毫升含有0.02mgVC;
⑷ 0.02%2,6-二氯靛酚溶液:称取2,6-二氯靛酚50mg,溶于200ml含有52mg碳酸氢钠的热水中,冷却后,稀释至250ml,过滤于棕色瓶中,贮存于冰箱内,应用过程中每星期标定一次。
标定一:吸标液(VC)5ml于三角瓶→加6%KI溶液0.5ml→加1%淀粉3滴→用0.001N KIO3标液滴定到淡兰色。
计算:
抗坏血酸浓度(mg/ml)= (V1 × 0.088)/ V2
V1 - 滴定时消耗0.001N KIO3标液的体积(ml)
V2 -维生素C重量(g)
0.088 -1ml0.001N KIO3标液≈维生素C的量(mg/ml)
标定二:吸5ml已知浓度V C标液 → 加5ml1%草酸 → 用染料2,6-二氯靛酚滴定至溶液呈粉红色,在15秒不褪色为终点
计算:每毫升2,6-二氯靛酚相当于维生素C的毫克数等于滴定度(T)
T= (C × V1)/ V2
C - 维生素C的浓度(mg/ml)
V1 -维生素C的体积(ml)
V2 -消耗2,6-二氯靛酚的体积(ml)