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2014-11-27
采用SDS法提取小麦基因组DNA。每份材料分别提取二粒种子的DNA,利用紫外分光光度计检测DNA浓度,终浓度调整至20 ng·μL-1。
1.3 STS标记检测
利用Ragupathy等开发的显性STS标记检测Bx7OE基因。引物由天津润泰科技发展有限公司合成。
标记(重复片段与逆转座子左边结合引物):TaBAC1215C06-F517:5‘-ACGTGTCCAAGCTTTGGTTC-3‘,
TaBAC1215C06-R964:5‘-GATTGGTGGGTGGATACAGG-3‘;
PCR反应体系为20 μL,含10×PCR Buffer 2 μL,d NTP(A、T、C、G)各200 μmol·L-1,每条引物1 μL (10 mmol·L-1),Taq DNA聚合酶(Takara)1 U,模板DNA 50 ng。标记1的PCR反应程序为:94 ℃变性5 min;94 ℃变性30 s,63 ℃退火30 s,72 ℃延伸1 min,35个循环;72 ℃延伸5 min。
PCR扩增产物以1.5%的琼脂糖凝胶电泳分离检测,缓冲液体系为1×TAE溶液,180 V电压电泳30 min,溴化乙锭染色后,用Gel Doc XR System扫描成像并存入计算机。
7OE亚基对改良小麦品质作用较大,8分钟带宽可作为品质分析的重要指标之一,此标记特异性较好,可用于中国小麦的品质改良。编辑老师在此也特别为朋友们编辑整理了浅谈小麦7OE亚基导入和揉面特性。
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标签:农林学论文
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