1.3 次生代谢产物含量的测定

1.3.1 总黄酮的提取与测定[3] 取上述绵毛鹿茸草提取液样品0.2ml，挥去溶剂后用甲醇定容至25ml，取其中1ml，置10ml离心管中，加入4ml 0.1mol/L三氯化铝-甲醇溶液，摇匀，在420nm处测定吸光度。以芦丁为标准品，其回归方程为y=9.6101x+0.0147，R2=0.9991。

1.3.2 总绿原酸的提取与测定[4] 取上述绵毛鹿茸草提取液样品0.2ml，挥去溶剂后用95%乙醇定容至25ml，取1ml，置25ml容量瓶中，加入0.2mol/LHCl定容至刻度，摇匀，以试剂空白为对照，在324nm处测定吸光度。以绿原酸为标准品，其回归方程为y=66.064x+0.0134，R2=0.9995。

1.3.3 总生物碱的抽提与测定[5] 取上述绵毛鹿茸草提取液样品0.2ml，挥去溶剂后用90%乙醇定容至25ml。取提取液1.4ml置于精密加入4ml氯仿的分液漏斗中，加入7.2×10-4mol/L溴甲酚绿pH=4.42缓冲溶液0.6ml，振摇1min，静置1h，取澄清的氯仿液，以试剂空白作对照，于417nm处测定吸收度。以小檗碱为标

准品，其回归方程为y=6.6x-0.0102，R2=0.9999。

1.3.4 总皂甙的提取与测定[6] 取上述绵毛鹿茸草提取液样品0.2ml，挥去溶剂后用甲醇定容至25ml，取1ml置25ml容量瓶中，挥去溶剂后，加入0.2ml 5%香草醛冰醋酸溶液，再加入0.8ml高氯酸，于70℃水浴加热20min，取出，冷却，加5ml冰醋酸，以试剂空白作对照，于560nm波长处测其吸光度。以人参皂甙Rb为标准品，其回归方程为y=27.763x+0.0901，R2=0.9716。

1.3.5 游离蒽醌的提取与测定[7] 取上述绵毛鹿茸草提取液样品0.2ml，放入10ml离心管中，水浴蒸干溶剂，加入5%醋酸镁乙醇溶液5ml，以试剂空白为对照，在498nm处测定吸光度。以1，8二羟基蒽醌为标准品，其回归方程为y=47.464x+0.0012，R2=0.9996。

1.4 抑菌活性的研究 以滤纸琼脂扩散法测定绵毛鹿茸草三种溶剂提取物对肺炎双球菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌的抑菌效果。将经过记数的菌液稀释后，控制100μL含104cfu，涂平板。将灭菌后滤纸片(直径为6mm)浸泡在棉毛鹿茸草提取液中。在已涂菌的平板上放置上述滤纸片，并以蒸馏水为阴性，链霉素为阳性对照，每一样品重复3次。处理后的平板放在30℃培养24h，观察并记录抑菌圈的直径大小[8]。

1.5 数据的处理 试验处理及数据测定均重复3次，将所得数据输入SPSS11.5for Windows数据分析系统进行统计，并对次生代谢产物的含量与抑菌圈的大小进行相关分析。

2 结果与分析

绵毛鹿茸草不同提取液次生代谢产物含量以及它们对四种细菌的抑菌圈大小如表1所示。其中次生代谢产物的含量为百分含量，抑菌活性以抑菌圈的大小(mm)表示，阴性对照抑菌圈直径6mm，阳性对照(链霉素)抑菌圈26mm;抑菌圈直径在6～8mm为微弱抑菌，8～12mm为弱抑菌，12～20mm为中等抑菌，20～24mm为强抑菌。绵毛鹿茸草的的次生代谢产物和抑菌圈直径的相关性如表2所示。

表1 绵毛鹿茸草提取液次生代谢产物的含量(g/kg)及其抑菌圈直径(略)