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作者：董建华 叶再元 李曙光 陶厚权 杨琼

【摘要】 [目的]明确穿心莲内酯对不同分化胃癌细胞株的体外增殖的影响。[方法]以不同浓度的穿心莲内酯处理低分化(MKN45)、中分化 (SGC7901)和高分化(MKN28)胃腺癌细胞株，分别温育24h 、48h 、72h;采用噻唑蓝比色法检测各和穿心莲内酯对癌细胞的药物半数抑制浓度(IC50 )，比较穿心莲内酯对不同分化胃癌细胞株的体外增殖抑制作用的异同。[结果]穿心莲内酯对胃癌细胞株MKN45、SGC7901、MKN28的体外增殖均具有显著的抑制作用，并且呈剂量效应和时间效应关系。低分化的MKN45细胞株对穿心莲内酯的敏感性明显高于高分化的MKN28细胞株和中分化的SGC7901细胞株。[结论]穿心莲内酯对不同分化程度的胃腺癌细胞株体外增殖抑制作用不同。

【关键词】 穿心莲内酯;分化程度;胃癌细胞株;敏感性;MTT法

Abstract：[Objective] To determine the sensitivity of Andrographolide in gastric cancer cell lines in various degrees of differentiation.[Methods] Three gastric cancer cell lines including MKN45(1ow degree differentiation)，SGC7901(moderate degree differentiation) and MKN28 (high degree differentiation) were incubated with Andrographolide of various concentration at 24 hours，48 hours，72 hours.The optial density (OD)value of each group was examined by MTT test;compute the data to arrive at inhibition ratio(IR)and 50% inhibiting concentration ( IC50 )，make the sensitivity disparity clear by compare the data.[Results] Andrographolide had significant inhibition effects on the proliferation of MKN45，SGC7901 and MKN28 cells in vitro,in a time—dependent and dose—dependent way.Poorly differentiated gastric cancer cell line MKN45 is more sensitivity to chemotherapy than well differentiated MKN28 and moderately differentiated SGC7901.[Conclusion] The effect of Andrographolide on gastric cancer cells in various degrees of differentiation were different.

Key words:Andrographolide; degrees of differentiation;gastric cancer cell1ines;sensitivity;MTT method

穿心莲内酯(Andrographolide)是爵床科植物穿心莲(Andrographis paniculata(Burm.f.)中提取到的二帖内酯类化合物，分子式是C20H30O5，是中药穿心莲的重要有效成分之一。具有抗菌、抗炎、抗病毒、免疫调节、治疗脑血管疾病、保肝利胆等作用，并具有低毒性、价格便宜的特点。以往研究表明，穿心莲内酯对乳腺癌MCF?7细胞、食管癌Ec9706细胞、结肠癌HCT?8和HCT?l16细胞、前列腺癌PC?3等肿瘤细胞，均有体外抗肿瘤作用。穿心莲内酯能抑制多种肿瘤细胞系的增殖[1]。但对胃癌细胞的作用未见报道。本研究通过体外细胞培养采用MTT法明确穿心莲内酯对高分化胃癌细胞株MKN28、中分化胃癌SGC7901、低化胃癌细胞株MKN45的体外增殖的影响，以期揭示穿心莲内酯对不同分化胃癌细胞的作用，为临床治疗胃癌用药提供实验依据。

1 实验材料

1.1 主要实验药品 穿心莲内酯(中国药品生物制品检定所 用二甲基亚砜(DMSO)溶解，配制成100mg/ml的溶液，-20℃保存备用)，RPMI?1640培养液(美国Gibco公司 加入青霉素和链霉素，使其浓度分别为100U/ml和100μg/ml)，胎牛血清(北京鼎国生物技术公司 56℃灭活30min,-20℃保存备用)，0.1MPBS液，胰酶(美国Gibco公司)，DMSO(无锡海硕生物有限公司)， 噻唑蓝(MTT，美国Genview公司 用无血清RPM1640 培养液配成1mg/ml)。

1.2 主要实验仪器 96孔培养板(德国Greiner公司)，超净工作台(苏州苏净集团安泰公司)，二氧化碳孵育箱(德国 Thermo公司)，自动酶标仪(瑞士Tecan 公司)。

1.3 试验用细胞 人高分化胃癌细胞株MKN28、中分化胃癌株SGC7901、低化胃癌细胞株MKN45，均由自上海交通大学消化外科实验中心惠赠。

2 实验方法

2.1 细胞培养 将3种细胞用含有10%小牛血清的RPMI1640 培养液,于37℃、5% CO2 的培养箱中培养,每2～3d 传代1 次,取对数生长期细胞用于实验。

2.2 实验分组 实验分为穿心莲内酯实验组、5?氟脲嘧啶(5?FU)对照组、阴性对照组、DMSO对照组和空白对照组。其中穿心莲内酯实验组包括7.5μg/ml、15μg/ml 、30μg/ml、60μg/ml、120μg/ml 共5个浓度组，每组设3个复孔;5?FU对照组、

阴性对照组、DMSO对照组、空白对照组每组各设5个复孔。