2.1.1 对照品溶液的制备：精密称取105℃干燥恒重的芦丁对照品16.50mg，加60%乙醇溶解定容于50ml容量瓶，得浓度为0.33mg/ml对照品溶液，备用。

2.1.2 供试品溶液的制备：定量称取乌蕨干燥粗粉5.0g，加16倍量0.1%HCl-60%乙醇回流提取4h，提取1次，提取液减压浓缩，加60%乙醇定容至25ml，作为供试品溶液备用。

2.1.3 标准曲线的制作：精密吸取标准品溶液0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0ml，分别置25ml容量瓶中，加入5%NaNO21.0ml，摇匀，放置6min后加入10%Al(NO3)31.0ml，摇匀，放置6min后加入4%NaOH 10ml，再加60%乙醇稀释至刻度，混匀，静置15min，于510nm处，以相应试剂作空白，测定吸光度，以芦丁浓度为纵坐标，以吸光度值为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程：Y=2.778X-0.0775(r=0.9991)，结果表明芦丁在0.016～0.99mg范围内呈良好的线性关系。

2.1.4 精密度实验：取芦丁对照品溶液2.0ml，置25ml容量瓶中，按“2.1.3”项操作，平行测定5次，结果其RSD为0.21%，表明精密度良好。

2.1.5 重复性实验：取同1份样品溶液5份，分别按“2.1.3”项操作，结果RSD为0.72%。

2.1.6 稳定性实验：取1份样品溶液，按上述实验方法在显色完全后0、10、20、30、45、60min分别测定吸光度，结果RSD为1.08%。实验表明：供试品溶液在1.0h内稳定的。

2.1.7 加样回收率实验：取已知总黄酮含量的乌蕨样品6份，分别精密添加已知浓度的芦丁对照品适量。按供试品溶液制备方法制备，按“2.1.3”项操作，测定总黄酮含量，计算测定回收率，结果平均回收率为99.34%，RSD为1.82%。

2.1.8 乌蕨不同部位总黄酮含量的测定：精密吸取提取液适量，按“2.1.3”项操作，测定吸光度A，结果见表1。 表1 乌蕨根、茎、叶、全草等不同部位总黄酮含量测定结果(略)

2.2 微量元素含量的测定[5]

2.2.1 供试品溶液的制备：各取药材约0.5g，精密称定，置50ml凯氏烧瓶，加8.0ml消化液[V(HNO3)∶V(HClO4)=4∶1]，静置过夜，加热回流消化至无色透明，冷却后，定量转移至100mL容量瓶中，加超纯水稀释至刻度，摇匀，备用。取相同体积的消化液，同法消化，制备空白溶液。

2.2.2 混合标准溶液的制备：分别取各重金属元素标准品溶液适量，用5%硝酸溶液制成混合溶液，梯度稀释，作为混合标准品溶液备用。

2.2.3 测定方法：仪器工作参数：检测器CID的低波段(<265nm)积分时间：15s;高波段(>265nm)积分时间：5s;进样蠕动泵转速：100r/min;进样雾化器氩气压力：28psi;辅助气流量：1.0L/min;高频发生器功率：1500W;样品冲洗时间：5s;测定波长范围：193.7～407.7nm。

依次将仪器的进样管插入各个浓度的混合标准品溶液中进行测定，以每一浓度测得的3次读数的平均值为纵坐标，相应元素标准溶液浓度为横坐标，作标准曲线，并进行方法学考察。由各元素的标准曲线计算微量元素的含量，测定结果见表2。表2 乌蕨根、茎、全草、叶等不同部位微量元素含量测定结果(略)

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