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作者：时昭红，张介眉，张书，冯云霞，侯光华

【摘要】 【目的】探讨微米大黄炭治疗胃溃疡出血的止血作用机制。【方法】选用昆明种小鼠和SD大鼠为研究对象，随机分为空白对照组、云南白药组(剂量为9g·kg-1·d-1)和微米大黄炭高、中、低剂量组(剂量分别为8、4、2g·kg-1·d-1)，灌胃给药6d后检测小鼠出、凝血时间及血小板计数;测定大鼠血小板功能及纤溶活性等指标。【结果】与空白对照组比较，微米大黄炭各剂量组均能缩短小鼠出、凝血时间(P<0?01)，增加血小板计数(P<0?05或P<0?01)，提高大鼠血小板聚集性，上调血栓烷素B2(TXB2)而下调6?酮?前列腺素F1α(6?keto?PGF1α)水平(P<0?05或P<0?01)，升高血小板颗粒膜蛋白?140(GMP?140)含量(P<0?05或P<0?01);缩短大鼠凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)(P<0?01)，而对组织型纤溶酶原激活剂(t?PA)和组织型纤溶酶原抑制剂(PAI?1)活性无显著影响(P>0?05)。【结论】通过激活内源性和外源性途径的多种凝血因子而促进凝血过程中的凝血酶原和凝血活酶的生成，增加血小板计数和聚集性可能是微米大黄炭止血的重要作用机制。

【关键词】 微米大黄炭/药理学;胃肠出血/中药疗法;疾病模型，动物;大鼠;小鼠

微米大黄炭为武汉市第一医院治疗消化性溃疡并出血的新型中药制剂，临床运用疗效确切[1]。本研究观察了该制剂对实验动物凝血时间、血液凝固系统、纤溶系统及血小板的影响，阐明其治疗胃溃疡出血的止血作用机制，现报道如下。

1材料与方法

1?1药物微米大黄炭由武汉市中西医结合医院制剂科制备(批号：200506);云南白药由云南白药集团股份有限公司生产(批号：20051113)。

1?2动物清洁级昆明种小鼠180只，体质量(20±2)g，雌雄各半，由同济医学院实验动物室提供，合格证号：SCXK(鄂)2004?0007;清洁级SD大鼠100只，体质量200~250g，雌雄各半，由同济医科大学动物中心提供，合格证号：SCXK(鄂)2004?0007。

1?3试剂与仪器大鼠组织型纤溶酶原激活剂及其抑制剂(t?PA/PAI?1)试剂盒及血小板颗粒膜蛋白?140(GMP?140)试剂盒均由大连泛邦化工有限公司提供;125I?6?酮?前列腺素F1α(6?keto?PGF1α)放射免疫分析药盒、125I?血栓烷素B2(TXB2)放射免疫分析药盒均购自北京科美东雅生物技术有限公司(生产批号：20060725);LBY?NJ2型血液凝聚仪(北京普利生公司产品);MK3型Thermo酶标仪(上海热电仪器有限公司);DFM?96型多管放射免疫计数器(合肥众成机电技术公司)。

1?4指标检测

1?4?1凝血时间和出血时间的测定取昆明种小鼠60只，雌雄各半，随机分为微米大黄炭低、中、高剂量组(简称大黄炭低、中、高剂量组)，云南白药组和空白对照组5组，每组12只，大黄炭低、中、高剂量组分别以2、4、8g·kg-1·d-1剂量灌胃给药，云南白药组给予云南白药，剂量为9g·kg-1·d-1，空白对照组给予等容积生理盐水。连续给药6d，1次/d。于末次给药1h后，按毛细血管法[2]测定凝血时间，以断尾法[3]记录小鼠出血时间。

1?4?2血小板计数的测定取昆明种小鼠60只，分组方法及给药方法同1?4?1，每组12只，于末次给药1h后摘取右侧眼球取血0?5mL，在全自动血小板计数仪上检测。

1?4?3血小板凝集性测定取SD大鼠50只，雌雄各半，分组方法及给药方法同1?4?1，每组10只。于末次给药0?5h后，30mg/L戊巴比妥钠10mL/kg腹腔注射麻醉，背位固定，心脏穿刺取血1?8mL，按说明书要求分离富含血小板血浆(PRP)和血小板血浆(PPP)，分别置于比色杯中，调整好透光度后，将诱导剂二磷酸腺苷(ADP)2μmol(1μmol/mL)加入PRP中，记录浊度改变曲线及最大聚集率(pMA/%)。

1?4?4TXB2、6?keto?PGF1α及血小板GMP?140含量测定取清洁级SD大鼠50只，雌雄各半，分组及给药方法同1?4?1，每组10只。末次给药后0?5h后，按0?02mL/kg剂量腹腔内注射20mg/L戊巴比妥钠麻醉，心脏穿刺取血2mL，用消炎痛乙二胺四乙酸二钠(EDTANa2)抗凝备检，以3 000r/min离心10min，分离血浆，严格按试剂盒说明书步骤操作，采用放射免疫法测定TXB2和6?keto?PGF1α含量，采用酶联免疫吸附(ELISA)双抗体夹心法测定GMP?140含量。

1?4?5组织型纤溶酶原激活剂(t?PA)及其抑制剂(PAI?1)水平测定取清洁级SD大鼠50只，雌雄各半，分组及给药方法同1?4?1，每组10只。末次给药后1h，以30mg/L戊巴比妥钠10mL/kg腹腔注射麻醉，背位固定，心脏穿刺取血2mL，用EDTANa2抗凝备检，3 500r/min离心15min，分离血浆，采用ELISA法检测t?PA、PAI?1水平。

1?4?6凝血酶原时间(PT)和活化部分凝血活酶时间(APTT)测定取清洁级SD大鼠50只，雌雄各半，分组及给药方法同1?4?1，每组10只。末次给药后1h,以30mg/L戊巴比妥钠10mL/kg腹腔注射麻醉，背位固定，心脏穿刺取血1?8mL，38mg/L枸椽酸钠(与血液容积比为1∶9)抗凝，以3 000r/min离心10min分离血浆后，在全自动血凝分析仪上检测PT和APTT值。

1?5统计学方法采用SPSS 13?0统计软件进行统计分析。

2结果

2?1各组对小鼠出、凝血时间及血小板计数的影响表1结果显示，大黄炭高、中、低剂量组和云南白药组均能缩短小鼠出、凝血时间，与空白对照组比较有显著性差异(P<0?01);与云南白药组比较，大黄炭高剂

量组作用显著(P<0?05)。各给药组均能显著提高小鼠血小板计数(P<0?05)，其中大黄炭高、中剂量组作用显著(P<0?01);与云南白药组比较，大黄炭高剂量组可显著提高小鼠血小板计数(P<0?05)。

2?2各组对大鼠血小板聚集性及TXB2、6?keto?PGF1α、GMP?140含量的影响表2结果显示，各给药组均能显著提高血小板最大聚集率及TXB2、GMP?140含量(P<0?05或P<0?01)，显著降低6?keto?PGF1α含量(P<0?05或P<0?01)，大黄炭低、中、高剂量作用呈现一定的剂量效应关系，且大黄炭高剂量组除GMP?140含量外，作用均优于云南白药组(P<0?05)。