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高效液相色谱法对于川芎不同炮制品中游离阿魏酸和总阿魏酸的含量测定

作者：夏荃，文惠玲，李土光 贺洁儿

【摘要】 【目的】测定并比较川芎不同炮制品中游离阿魏酸、总阿魏酸的含量。【方法】采用超声提取法，以甲醇—甲酸(95∶5,V/V)为游离阿魏酸的提取溶剂，以甲醇—20 g/L NaHCO3(95∶5,V/V)为总阿魏酸的提取溶剂;采用高效液相色谱(HPLC)法测定，色谱条件为：Diamonsil C18分析柱(250 mm×4?6 mm，5 μm);流动相为乙腈—体积分数1%冰醋酸(20∶80,V/V);检测波长：320 nm;流速:1?0 mL/min;柱温：室温。【结果】酒炙川芎的游离阿魏酸和总阿魏酸含量均高于生品及制川芎。川芎生品与不同制品水煎液中阿魏酸含量均高于其游离阿魏酸含量。【结论】本研究含量测定方法简便、准确，可用于川芎及其炮制品中阿魏酸含量的测定研究;测定川芎中总阿魏酸的含量更能反映川芎的质量。

【关键词】 川芎/生产与制备;川芎/化学;阿魏酸/分析;色谱法，高压液相

川芎为伞形科多年生草本川芎Ligusticum chuanxiong Hort?的根茎[1]，具有行气活血、祛风止痛之功效，临床上有生川芎、酒炙川芎以及制川芎(广东习用)等多个炮制品种。川芎中含有内酯类、生物碱、有机酸类或酚类以及中性油类等多种有效成分[2]，其中阿魏酸具有较强的生理活性，具有抑制血小板聚集、解除血管平滑肌痉挛、抗氧化和提高膜稳定性以及抗炎、镇痛、调节免疫功能等药理作用[3-4]。在川芎的质量控制研究中，以阿魏酸的定量分析较多，采用了不同的提取溶剂及提取方法，所测得阿魏酸的含量从0?49 mg/g至2?14 mg/g不等[5-8]。有文献报道[9]，当归中的阿魏酸松柏酯，因提取工艺不同可以在一定条件下水解为阿魏酸，故提出了游离阿魏酸和总阿魏酸的概念，前者为药材中的阿魏酸，而后者为游离阿魏酸及其衍生物水解所得阿魏酸之和，因此仅测定游离阿魏酸不足以反映药材的质量。川芎中亦含有阿魏酸松柏酯，本实验测定并比较了川芎不同炮制品中游离阿魏酸、总阿魏酸的含量，并对川芎不同炮制品水煎液中的阿魏酸含量进行了测定，现报道如下。

1材料与方法

1?1主要仪器与试剂天美高效液相色谱仪(包括HITACHI LC2130泵、L2200自动进样器、LC2030紫外检测器、T2000P工作站);CQ5200型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司);试验所用水为超纯水，乙腈为色谱纯，其他所用试剂均为分析纯。

1?2药物川芎药材购自广州市大翔药材有限公司，经过广州中医药大学中药鉴定教研室李薇教授鉴定为伞形科藁本属植物川芎Ligusticum chuanxiong Hort?的根茎;阿魏酸对照品均购自中国药品生物制品检定所，批号：110773?200611。

1?3药物制备取原药材，除去杂质，洗净，闷润，切薄片，低温烘干，筛去碎屑，制备生川芎饮片[10];取生川芎片，按质量比10∶1加入黄酒拌匀，稍闷润，待酒被吸尽后，置炒制容器内，用文火加热，炒至棕黄色时，取出晾凉，筛去碎屑，制备酒炙川芎饮片[10];取净川芎，用水浸3 h，捞起，沥干水，按质量比10∶1加入黄酒拌匀，待酒被吸尽后，蒸3 h至透心，取出，放冷，切薄片，低温烘干，筛去碎屑，制备制川芎饮片[11]。

1?4提取溶剂的确定采用超声提取方法，选取了甲醇，甲醇—水(95∶5,V/V)，甲醇—甲酸(95∶5,V/V)，甲醇?20 g/L NaHCO3(95∶5,V/V)等提取溶剂进行比较，采用高效液相色谱(HPLC)法，色谱条件为A：体积分数0?1%冰醋酸水溶液,B:乙腈;梯度洗脱：体积分数19%B 0～18 min，18%～60%B 18～60 min;检测波长：320 nm;流速:1?0 mL/min;柱温:30 ℃;进样量:10 μL，观察HPLC图谱，发现阿魏酸的含量发生规律性的变化，在用甲醇?20 g/L NaHCO3为溶剂提取时，阿魏酸峰(A峰)面积增大，而B峰(根据文献[9]推测可能为阿魏酸松柏酯峰)几乎消失;以甲醇—甲酸为溶剂提取时，A峰面积最小，B/ A峰面积比最大(图1)。按照文献[9]方法测定游离阿魏酸以尽量保留B峰，测定总阿魏酸则以B峰消失，A 峰明显增大为标准。故选用甲醇—甲酸作为提取川芎药材游离阿魏酸的溶剂，以甲醇—20 g/L NaHCO3为提取总阿魏酸的溶剂。

1?甲醇—20 g/L NaHCO3;2?甲醇—水;3?甲醇;4?甲醇—甲酸