【编者按】：护理论文是科技论文的一种是用来进行护理科学研究和描述研究成果的论说性文章。精品学习网论文网为您提供护理论文范文参考，以及论文写作指导和格式排版要求，解决您在论文写作中的难题。

关于草珊瑚离体不定丛芽诱导因子筛选的研究

作者：潘见欢 潘超美 陈良坚 黄崇才 赖珍珍

【摘要】 【目的】　探讨影响草珊瑚不定芽诱导的培养因素，为建立草珊瑚初代离体培养体系提供依据。【方法】以草珊瑚下胚轴诱导获得的无菌再生苗茎段为外植体，考察6?苄氨基嘌呤(6?BA)和吲哚丁酸(IBA)不同浓度配比、光照时间和强度以及温度对草珊瑚离体不定芽高频诱导的影响。【结果】6?BA和IBA组合能有效提高草珊瑚不定芽的诱导率，而高浓度的植物激素会抑制草珊瑚不定芽的生长;草珊瑚在散射光或弱直射光照射下生长势头好，暗培养或过强直射光会出现植株发黄、皱缩、甚至死亡的现象;在温度为25?℃时，草珊瑚不定芽诱导率达到100?%，低于25?℃或高于30?℃均不利于其生长。【结论】以MS培养基为基本培养基，附加2?5?mg/L 6?BA+ 0?1?mg/L IBA，温度为25?℃，采用柔弱自然散射光或低于?2?000?lx?直射光照射，时间少于8?h能有效促进草珊瑚离体不定芽的诱导，诱导率达82?98?%。?

【关键词】 草珊瑚/生长和发育;　不定丛芽;　培养基，条件性?

草珊瑚?Sarcandra glabra?( Thumb?) Nakai ，属金粟兰科Chloranthaceae 草珊瑚属?Sarcandra?，又叫九节茶、肿节风、接骨木，为多年生草本或亚灌木。草珊瑚具消炎、清热、解毒和舒筋活血作用，临床用于治疗多种炎症。最新研究发现草珊瑚对肿瘤，尤其是急性白血病有一定治疗效果??[1]?。近年来草珊瑚已被开发成一系列药品和日用品，如草珊瑚口服液??[2]?、草珊瑚清口香??[3]?和草珊瑚注射液??[4]?等。随着开发利用的不断扩展， 忽视了对其资源的保护，致使野生资源遭受毁灭性的破坏，因此挽救草珊瑚种质资源的研究势在必行。目前对草珊瑚的研究主要集中在常规栽培、药材的组织鉴别以及化学成分组成的分析上，在离体快速繁殖方面的研究甚少。本文在建立草珊瑚离体快速繁殖培养体系研究的基础上，对草珊瑚的离体丛芽诱导培养进行了多方面考察，旨在为肿节风药材生产的源头——草珊瑚优质种苗(试管苗)繁育的规模化、产业化生产奠定基础。现报道如下。?

1　材料与方法?

1?1　药材　试验药材采自广州帽峰山野生草珊瑚，经广州中医药大学药用植物学教研室潘超美教授鉴定，确认为金粟兰科植物草珊瑚?Sarcandra glabra?(Thumb?)Nakai。取其种子，经消毒后在无菌条件下诱导萌发，切取胚和下胚轴诱导获得无菌丛芽和再生植株，以无菌再生苗的茎段作为诱导不定芽的材料(图1)。

1?2　主要仪器与试剂　6?苄氨基嘌呤(6?BA)由上海求精生化试剂仪器有限公司生产(批号：20060718);吲哚丁酸(IBA)由上海求精生化试剂仪器有限公司生产(批号：20070310);琼脂粉由湛江新台兴海洋生物制品有限公司生产(批号：2007818);其他试剂均为化学纯;DL?CJ?1F型单人双面超净工作台由哈尔滨东联电子技术有限公司提供;YXQ SGD型全自动高压灭菌锅由广东医疗器械厂提供;XS125A型电子分析天平由瑞士Sartorius公司提供。LRH?300?G型生物光照培养箱由广东医疗器械厂提供。表1　丛芽诱导培养基的L??16?(4?5) 正交试验设计

1?3　多种影响因子的筛选??[5]?　采用MS培养基为基本培养基，培养基按照常规方法，根据表1正交试验设计的不同配方配制， 添加30?g/L的蔗糖、?6?g/L?琼脂粉，pH?5?8～6?0，121?℃～124?℃(1?1?kg/cm?2压力)灭菌15?min。在无菌条件下，将草珊瑚无菌再生苗切成1～1?5?cm长带节茎段，接种于培养基中，每瓶3～4个。培养温度(25±2)?℃，光照用日光灯1?800～2?200?lx，每天连续光照8?h。28?d后统计不定芽诱导率及不定芽的增殖率。?

2　结果与分析?

2?1　不同激素配比对草珊瑚丛芽诱导的影响　从表2结果可知，处理10和处理14均能获得较高的不定芽诱导率，即3?mg/L?6?BA+0?1?mg/L?IBA和2?5?mg/L?6?BA+0?1?mg/L?IBA的组合，在此激素组合水平下， 草珊瑚不定芽生长迅速，较粗壮，说明草珊瑚不定芽诱导阶段要求有较高的外源激素水平。但高含量的细胞分裂素(处理13~16)会在不定芽形成后，芽的基部膨大导致材料愈伤化。故不定芽诱导中以处理10组合较为合适。在两种激素的试验处理中，单独使用6?BA的量达3?mg/L(处理13)时，不定芽诱导率可提高到73?68?%，不定芽萌动时间提早，接种后15?d左右就会看到茎节处长出不定丛芽，但芽体较纤弱。?

图2结果显示，虽然6?BA、IBA和诱导率之间无明显线性关系，但在IBA浓度较低 (IBA=0、0?1?mg/L)时，随着6?BA浓度的增加，诱导率基本呈现增加的趋势，当6?BA为2?5?mg/L，IBA为0?1?mg/L时诱导率最高，达到82?98?%。当IBA浓度大于0?1?mg/L时，诱导率的变化波动较大。结合表2的直观分析表明，?R??A为0?219、?R??B为0?226，两种因子对丛芽诱导产生效应是IBA>?6?BA?，6?BA是影响不定丛芽分化的主要因子。

2?2　光照时间和强度对草珊瑚丛芽诱导的影响?

将草珊瑚无菌再生苗茎段接种到试验处理10的培养基中，置于光照培养箱中，温度设定为?25?℃?，考察不同光照时间和强度对草珊瑚丛芽诱导的影响，结果见图3、图4。在光照强度约为?1?800?～2?000?lx的直光培养中， 光照8?h的草珊瑚丛芽生长较快，植株生长迅速、叶片颜色深绿。但随着光照时间的增长，诱导率逐渐下降。此外，自然光照比放在培养箱中直光光照生长更迅速、丛芽诱导更好。而图4结果表明，光照强度对草珊瑚不定芽的生长有很大的影响，每增加2?000?lx，诱导率都降低10?%以上，在强光照下，草珊瑚不定芽生长变缓慢，叶片边缘发黄、皱缩，几乎不萌发出新芽，这一现象与草珊瑚的喜阴习性相符。?表2　不定芽诱导培养基的正交试验结果及直观分析

另外本实验也考察了黑暗中草珊瑚不定芽的生长情况，发现草珊瑚不定芽生长十分缓慢，甚至叶片边缘变黄、脱落，最终死亡，所以暗培养不适合用于草珊瑚茎段不定芽的诱导。?

2?3　温度对草珊瑚丛芽诱导的影响?