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浅谈高效液相色谱—串联质谱法测定阿托伐他汀的血药浓度

【摘要】目的 建立高效液相色谱—串联质谱法测定阿托伐他汀血药浓度的方法。方法 采用纯乙腈超声提取，高速离心沉淀蛋白后，以乙腈-乙酸铵缓冲液作为流动相，Phenomenex Luna 3μ C18(2) 100 A (150×2.00mm 3μm)反相色谱柱，在正离子模式下以电喷雾电离串联质谱进行测定。结果 血浆中阿托伐他汀的线性范围为0.1-20 ng/mL，定量限为 0.1 ng/mL。方法回收率为 96%～103%，日间 、日内RSD 均小于6%。 结论 本方法简单、灵敏、准确，适用于阿托伐他汀人体血药浓度的检测。

【关键词】阿托伐他汀 血药浓度 高效液相色谱—串联质谱法(LC-MS/MS)

阿托伐他汀钙片是他汀类血脂调节药，为3-羟基-3-甲基一戊二酰辅酶A(HMG-CoA)还原酶抑制剂[1]，它能够降低血浆胆固醇和脂蛋白水平，减少低密度脂蛋白的生成，临床上用于家族性高胆固醇血症、混合性高脂血症等症。因其降脂作用强，副作用小，在高脂血症，特别是高胆固醇血症的治疗中得到广泛应用[2]。本文建立了高效液相色谱—串联质谱法测定血浆样品中的阿托伐他汀，本法专灵敏度高、重现性好，样品处理方法简便。化学结构见图1。

图1 阿托伐他汀的结构式

Fig.1 Structure of Atorvastatin

1 实验部分

1.1材料和试剂

阿托伐他汀标准品购自中国药品生物制品检定所;前处理所用乙腈为分析纯，流动相的乙腈为色谱纯(德国 MERCK);实验用水为超纯水，由 Milli-Q系统制作(美国Millipore公司)。

1.2液相色谱条件

液相色谱仪器为岛津Prominence UFLC;色谱柱选用Phenomenex Luna 3μ C18(2) 100 A (150×2.00mm 3μm);柱温40℃;流动相：乙腈—乙酸铵缓冲液(乙酸铵5mmol/L、甲酸0.5%(v/v))(体积比6：4)，等度洗脱;进样量10μL;流速保持在0.3mL/min。

1.3质谱条件

质谱仪器为美国AB公司的API4000 Q-trap;电离方式：ESI(+);选择多重反应监(MRM);电离电压5500V，辅助加热温度500℃，气帘气30psi，雾化气3psi，碰撞气：中等，离子源气体1：50psi，离子源气体2：60psi。阿托他汀在ESI(+)[M+H]+ 的MRM模式下的质谱参数见表1。

1.4血浆样品处理

精确量取血浆样品0.5mL于10mL离心管中，准确加入2.5mL乙腈，涡旋2min后，超声10min，在 4500r/min转速下离心5min。移取上清液用氮气吹干，用1mL的50%乙腈水定容 ，过0.22μm滤膜 ，供LC-MS-MS分析。

表1 阿托伐他汀在ESI(+)[M+H]+ 的MRM模式下的质谱参数