2.2 线性关系考察

　　取黄芩苷对照品约12.0 mg，精密称定，置25 ml棕色量瓶中，加甲醇适量，振摇使完全溶解后，稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。按照“2.1”项色谱条件，分别进样1、3、5、7、9、11、 13、15、17 μl，记录芍药苷峰面积值，以峰面积积分值(Y)对对照品浓度(X)进行线性回归，得回归方程： Y=235.05674X+12.52003 r=0.9999。结果表明，黄芩苷对照品在0.4800～8.1600 μg范围内与峰面积值呈良好的线性关系。

　　2.3 供试品溶液及阴性对照溶液的制备

　　取本品约0.1 g，研细，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25 ml，称定重量，浸泡4 小时，超声处理20 分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，用0.45 um微孔滤膜滤过，续滤液作为供试品溶液。另取缺白芍的其他味药按处方工艺制成阴性制剂，按上述方法制备阴性对照溶液。

　　2.4 干扰试验

　　取对照品溶液、供试品溶液及阴性对照溶液各10 μl，按照“2.1”项色谱条件，分别进样测定，记录色谱图，黄芩苷的保留时间为8.818 min，理论塔板数为3512，黄芩苷与相邻峰的分离度大于1.5，峰型对称。阴性样品无干扰，结果见图1。

　　C阴性对照溶液

　　图1 高效液相色谱图

　　2.5 精密度试验

　　取2.2对照品溶液，重复进样6 次，每次10 μl，记录绿原酸峰面积，RSD=0.39%(n=6)，表明精密度良好。

　　2.6 稳定性试验

　　取同一对照品溶液，分别在0、2、4、8、12、16、24 h进样测定，RSD=0.43%，供试品溶液在24 小时内峰面积基本稳定。

　　2.7 加样回收率试验

　　称取6 份已知含量为6.173 mg/g的样品约0.05 g，精密称定，分别置1～6 号锥形瓶中，分别精密加入对照品储备液1 ml，按照“2.4”项下供试品溶液制备方法制备溶液，按照“2.1”项色谱条件，分别测定，结果见表1。

　　表1 加样回收率试验结果

　　称样量 样中黄芩苷的含量 对照加入量 测得黄芩苷的含量 回收率 平均回收率 RSD

　　(g) (mg) (mg) (mg) (%) (%) (%)

　　0.05132 0.3168 0.4800 0.7904 99.20

　　0.04937 0.3048 0.4800 0.7806 99.46

　　0.04898 0.3024 0.4800 0.7729 98.79 98.94 0.36

　　0.05064 0.3126 0.4800 0.7809 98.52

　　0.05028 0.3104 0.4800 0.7828 99.04

　　0.04966 0.3066 0.4800 0.7759 98.64

　　2.8 样品测定

　　取3批样品，按“2.4”项下方法制备供试品溶液，各进样10 μl，按外标法计算绿原酸的含量，结果见表2。

　　表2 3批样品中黄芩苷的含量

　　样品编号 1 2 3

　　样品含量(mg/g) 6.092 6.123 6.112

　　3 讨论

　　3.1 提取溶剂的选择

　　有文献报道以稀乙醇为提取溶剂[3]，经过比较发现以甲醇为溶剂测定含量所得的含量高。

　　3.2 流动相选择

　　本试验曾用甲醇-0.05 mol/l磷酸二氢钾溶液(40∶65)为流动相[4]，主成分峰出峰效果较差，而采用乙腈-0.1%磷酸(14：86)为流动相，色谱峰显示，黄芩苷与相邻的组分分离度大于1.5，具有较好的分离效果，且理论板数较高。

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