土甘草药理作用目的对土甘草水提取物和醇提取物的抗炎、镇痛作用及急性毒性进行研究。

1材料与仪器

1.1药物与试剂

土甘草药材购自广西靖西县药市并经广西中医学院生药鉴定教研室田辉副教授鉴定为豆科植物毛果鱼藤DerriseriocarpaHow。

土甘草水提取物和乙醇提取物样品由本实验室自制提供。二甲苯为广州新港化工厂生产;阿司匹林片为湖南新汇制药有限公司生产,批号080101。

1.2动物

SPF级昆明种小鼠,18~22g,雌雄兼用,清洁级动物,由广西医科大学实验动物中心提供,许可证号:SCXK桂2003-0003。小鼠分性别饲养于空调室内,室温(22±2)℃,湿度(70±5)%,喂标准颗粒饲料,自由饮水和摄食。

1.3仪器

棱光-722型可见分光光度计;FA1004型万分之一电子天平,由上海精密科学仪器有限公司生产。

2方法与结果

2.1二甲苯致小鼠耳肿廓胀实验

昆明种小鼠50只,随机分为5组。即空白对照组、阳性对照组(阿司匹林200mg·kg-1)和土甘草高、中、低剂量组。分别灌胃给药1次/d,连续给药4d,末次给药30min后,于小鼠右耳两面涂二甲苯0.05ml致炎,左耳不涂为正常耳;30min后处死小鼠,沿耳廓基线剪下双耳,用直径8mm打孔器在同一部位取下耳片,于分析天平上称重,以左右耳片重量差值表示炎性肿胀程度。计算抑制率。抑制率(%)=(空白对照组肿胀度-给药组肿胀度)÷空白组肿胀度×100%。见表1~2。表1土甘草水提取物对小鼠二甲苯致耳廓肿胀的影响(略)表2土甘草醇提取物对小鼠二甲苯致耳廓肿胀的影响(略)

实验结果显示,土甘草水提取物高、中、低剂量组均对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀有明显抑制作用(P<0.01,P<0.05),其抑制率均在30%以上,抑制率随剂量的增大而增大,且抗炎抑制率高于阿司匹林;土甘草醇提取物中、高剂量对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀有明显抑制作用(P<0.05),其中中剂量抑制率低于阿司匹林,而高剂量抗炎抑制率则高于阿司匹林。

2.2小鼠醋酸致痛扭体法实验

取健康小鼠50只,雌雄各半,随机分成5组。即空白对照组、阳性对照组(阿司匹林200mg·kg-1)和土甘草高、中、低剂量组。每组10只,分别灌胃药物或等量水4d,第4天药后1h各组小鼠均腹腔注射0.7%醋酸溶液0.2ml/只,观察注射醋酸后10min内小鼠扭体反应的次数。求得扭体反应抑制率。抑制率(%)=(空白组扭体反应次数-给药组扭体反应次数)÷空白组扭体反应次数×100%。见表3~4。表3土甘草水提取物扭体法镇痛实验结果(略)表4土甘草醇提取物扭体法镇痛实验结果(略)

实验结果显示,土甘草水提取物高、中、低剂量均具有抑制小鼠醋酸扭体反应的作用(P<0.01),其镇痛率低于阿司匹林。抑制率均在50%以上,抑制率随剂量的增大而增大;土甘草醇提取物高、中剂量具有抑制小鼠醋酸扭体反应的作用(P<0.01,P<0.05),其镇痛率低于阿司匹林,抑制率随剂量的增大而增大,以高剂量抑制作用尤为明显。

2.3毒理研究

2.3.1水提物最大耐受量(MTD)测定

取土甘草切片,晾干,粉碎成粗粉,加8倍量水,浸泡后加热煮沸提取,冷却后用100目滤布滤过,煮提2次,合并滤液。滤液水浴浓缩。实验时以蒸馏水稀释至1.57g/ml。参考预实验结果,取禁食16h的小鼠20只,雌雄各半,按1.57g/ml、40ml·kg-1灌胃给药,于给药后

1、2

4、72h至第7天,每天观察并记录小鼠的体质量、皮肤毛发、眼和粘膜的变化、呼吸、中枢神经系统、四肢活动等变化及其中毒和死亡情况。以1.57g·ml-1,40ml·kg-1土甘草水提物灌胃给药后,小鼠均出现蜷卧少动症状,24h后恢复正常。观察7d,小鼠的行为、进食、皮毛、眼和粘膜、呼吸、四肢活动和体质量均无异常,未出现其它毒性反应。土甘草水提物对小鼠灌胃给药的最大耐受量为62.8g生药·kg-1。土甘草水提物灌胃给药对小鼠体质量的影响结果见表5。

2.3.2醇提物最大耐受量(MTD)测定