2.1 色谱条件与系统适应性试验

色谱柱：Kromasil C18(4.6 mm×150 mm,5 μm);流动相：乙腈-0.05%磷酸水溶液,梯度洗脱程序为：0 min(20∶80)-20 min (40∶60)-30 min(20∶80);流速：1 mL/min;检测波长：203 nm, 进样量：10 μL;柱温：30 ℃。分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μL,注入液相色谱仪,对照品溶液与供试品溶液依次出现3个峰：三七皂苷R1(保留时间7.45 min)、人参皂苷Rg1(保留时间8.54 min)、人参皂苷Rb1(保留时间16.73 min),理论板数按人参皂苷Rg1峰计算不低于8 000,3组分理论板数均在7 000以上。此条件下对照品、供试品色谱图见图1。

2.2 对照品溶液的制备

取经60 ℃减压干燥2 h的三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1对照品适量,加甲醇制成每1 mL中含三七皂苷R1 0.08 mg、人参皂苷Rg1 0.1 mg、人参皂苷Rb1 0.1 mg的混合溶液,摇匀,作为对照品溶液。

2.3 供试品溶液的制备

取抗瘤丸,研细,取1 g,精密称定,置索氏提取器中,加乙醚适量,置水浴上回流2 h,弃去乙醚液,取出滤纸筒挥尽乙醚,药渣转移至具塞锥形瓶中,精密加入甲醇10 mL,称定重量,超声处理30 min,取出,放冷,再称重,用甲醇补足减失的重量,过滤,取续滤液作为供试品溶液。

2.4 阴性溶液的制备

按抗瘤丸处方和置备工艺制备缺三七药材的阴性对照样品,依“2.3”项下方法制备阴性对照品溶液,备用。

2.5 线性关系的考察

精密吸取“2.2”项下对照品混和溶液1、2、4、5、7.5 mL,分别置于10 mL量瓶中,加甲醇稀释至刻度,精密吸取10 μL,依次进样,测定峰面积积分值。以色谱峰面积为纵坐标(Y),以进样浓度(μg/mL)为横坐标(X),进行回归分析。结果三七皂苷R1曲线方程为：Y=27.131 5X-0.406 642(r=0.999 9,n=6),在82.8～621 μg/mL范围内线性关系良好;人参皂苷Rg1曲线方程为：Y=33.135 7X-19.473 7(r=0.999 6,n=6),在109.8～823.5 μg/mL范围内线性关系良好;人参皂苷Rb1曲线方程为：Y=24.417 2X+22.076 4(r=0.999 9,n=6),在112.6～844.5 μg/mL范围内线性关系良好。

2.6 精密度试验