精密吸取对照品溶液10 μL,连续进样5次,三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1峰面积的相对标准偏差(RSD)分别为0.38%、0.22%、0.38%,结果表明精密度良好。

2.7 稳定性试验

精密吸取对照品溶液10 μL,分别于0、2、4、6、8、12 h进样测定,三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1峰面积的相对标准偏差(RSD)分别为0.34%、0.20%、0.34%(n=6)。结果表明对照品在制备后12 h内稳定。

2.8 重复性试验

精密称取同一样品(批号20061031)的样品5份,依“2.3”项下方法制备供试品溶液并按“2.1”项下色谱条件测定。结果三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1峰面积的相对标准偏差(RSD)分别为1.33%、2.28%、2.76%。

2.9 阴性对照试验

精密吸取阴性对照液,按“2.1”项下色谱条件测定,在三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1处无吸收蜂,表明抗瘤丸中的其它成分对三七成分的测定不干扰。

2.10 加样回收率试验

精密称取同一批已知含量的本品研匀,精密加入一定量的三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1,依“2.3”项下方法制备,并按“2.1”项下色谱条件测定,计算回收率,结果见表1～表3。表1 三七皂苷R1回收率试验结果(略)表2 人参皂苷Rg1回收率试验结果(略)表3 人参皂苷Rb1回收率试验结果(略)

2.11 样品含量测定

取不同批号的供试品,依“2.3”项下方法制备,并按“2.1”项下色谱条件测定,结果见表4。表4 样品含量测定结果(略)

3 讨论

3.1 提取方法的选择

本品组方较大,提取方法的选择非常重要。通过查阅文献,提取三七皂苷的基本方法有乙醚除脂、甲醇提取、水饱和的正丁醇和氨试液萃取[1],此方法提取繁琐,所用试剂较多,耗时。有大孔树脂的方法[2],但对被测成分有损失,且耗时,不适合此实验。通过几种方法的比较最后确定：乙醚回流2 h,甲醇超声提取。此方法简便快捷,提取有效率高,节省时间,节约试剂。

3.2 流动相的选择

关于HPLC测定三七中皂苷类成分的含量方法,文献报道较多。《中华人民共和国药典》中人参皂苷Rg1等含量测定采用乙腈-0.05%磷酸溶液(99∶400)[3],文献[4]采用甲醇-水(72∶28)为流动相系统,结果三七皂苷均不能达到基线分离。在实验的研究过程中通过采用不同比例的乙腈-0.05%磷酸溶液[5-6]、乙腈-水[7]或甲醇-水[8]梯度洗脱,用乙腈-水[8-9]或乙腈- 0.05%磷酸溶液梯度洗脱[10]等,结果表明,以乙腈-0.05%磷酸溶液0 min(20∶80)-20 min(40∶60)-30 min(20∶80)为流动相,三七皂苷R1及人参皂苷Rg1、Rb1峰的相对保留时间适中,分离效果较好。

本试验建立了HPLC法测定抗瘤丸中三七总皂苷R1、人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1含量的方法[11],简便、准确、重现性好,为制定该制剂质量标准提供了依据。

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