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Cloning, Expression and Purification of Mr 38 000 protein
from Mycobacterium tuberculosis
ZHANG Ming， LI Jin-cheng， LIN Hang
(Department of internal neurology, 2. emergency department, the Fu Zhou general hospital, Fu Zhou, 350025, P. R. China)
[Abstract] To obtain Mycobacterium tuberculosis Mr 38 000 protein from H37Rv-DNA, express efficiently in E. coli and purify the Mr 38 000 proteins. Mr 38 000 protein gene was amplified by PCR from the genome of H37Rv and cloned into pGEM-T-Easy vector. After sequenced, Mr 38 000 protein gene was recombinated expression vector pQE-80L by restriction enzyme digestion, named pQE-80L-Mr 38 000. The plasmid pQE-80L-Mr 38 000 was transformed into E.coli DH5α and induced by IPTG. Mr 38 000 protein expression was analyzed by SDS-PAGE and confirmed by western blot with mice-specific mAb against (His)6. Mr 38 000 protein gene was identical with GeBank reported. The pQE-80L-Mr 38 000 vector expressed protein with relative molecule weight about 38.5 kD, which could be caught by (His)6 mAb. The expressed protein could be purified by Ni-NTA system kit with denative condition. Mr 38 000 protein gene had been successfully cloned and efficiently expressed in E.coli, The results established the basis for further study of the function of Mr 38 000 protein.
[Key words] Mr38 000 protein; expression; purification; Mycobacterium tuberculosis (MTB)
结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis, MTB）是结核病(tuberculosis, TB)的病原体。其在患者体内主要为细胞内生长。诊断方法的欠缺是结核病流行的重要原因。 目前常用的PPD试验，常使BCG疫苗接种者被误检为阳性[1]，且对后期结核患者敏感性较低，存在明显不足。近年来， 有研究发现Mr 38 000 蛋白具有强的免疫原性，而成为结核分枝杆菌抗原的研究热点[2, 3]，可能成为结核病血清学诊断试剂和疫苗研究的候选抗原之一。为此，我们在原核表达载体中表达结核分枝杆菌 Mr 38 000蛋白并对其进行了纯化，为进一步研究其抗原性和主要功能提供方便。