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【摘要】 [目的]观察中药清毒片、养正片对白血病细胞u?PA活性的影响。[方法]SD大鼠24只，随机分为4组：空白组用生理盐水，清毒片组用清毒片，养正片组用养正片灌胃,化疗组用阿糖胞苷腹腔注射，观察含药血清对HL?60 u?PA活性的影响。[结果]与空白对照组相比较，阿糖胞苷和清毒片、养正片药物血清对HL?60细胞培养液上清中u?PA的活性都有一定程度的影响，而以阿糖胞苷含药血清降低u?PA活性的效果较好。[结论]清毒片、养正片的临床治疗作用可能与其降低患者体内白血病细胞u?PA活性表达水平的作用有关。

【关键词】 清毒片;养正片;白血病;HL?60;u?PA

Abstract： [Objective]We observed the effect of Qingdupian and Yangzhengpian on the u?PA expression in leukemia cells.[Method]248 SD rats weigh (210±20)g,half male and half female,divided into 4 groups randomly: blank control(0) group,Qingdupian(Q) group，Yangzhengpian(Y) group and Chemotherapy(H) group.Blank control group were fed physiological saline,Q group were fed Qingdupian juice,Y group fed with Yangzhengpian juice,twice a day,3.5 days.H group were injected Ara?c through peritoneum,once a day,4 times in all.Draw blood of rats 1～2 hours after the last feed,extract the serum,and store the serum at 4℃.Treat the cells with RPM1640 containing 10% every kind of serum for 48 hours,precipitate the cells;the supernatant fluid was collected respectively for ELISA essay to test the activity of u?PA.[Result]The laboratory research showed that all the serum had inhibitive effect on u?PA activity of the supernatant fluid of HL?60 cells,and Ara?c containing serum had the best effect on declining u?PA activity.[Conclusion]Suggest the clinical therapeutic effect of Qingdupian and Yangzhengpian be related to its declining effect on u?PA activities of leukemia cells.

Key words: Qingdupian;Yangzhengpian;Leukemia;HL?60;u?PA

1 实验材料

1.1 实验材料 清洁级SD大鼠24只(购自广州中医药大学实验动物中心)，人早幼粒白血病细胞株HL?60(购自中山医科大学实验动物中心)，清毒片、养正片生药饮片各1剂(购自广州中医药大学第一附属医院),10%胎牛血清(购自杭州四季青公司)，完全RPMI?1640培养液(sigma 公司产品)，uPA活性检测ELISA试剂盒(Chemicon International,Inc.产品)，计数板，盖玻片，96孔板，加样枪，可处理吸头，一次性注射器，试管，Ep管，玻璃毛细管，灌胃针头，血分析用抗凝管、烧杯等。

1.2 实验仪器 倒置显微镜(Olympus产品)，细胞培养箱(NAPCO Series 5400 CO2 Incubator)，-20℃冰箱(HUALING BCD?268WA)、离心机(上海产TDL?5型)，电热恒温水温箱(上海跃进医疗器械厂)，全自动酶标仪(BIO?RAD Model 3550)，干燥皿，解剖台，高压锅，电炉等。

2 实验方法

2.1 分组与用药 将清毒片、养正片生药饮片用水煎浓缩法处理备用。制备清毒片、养正片药物血清(在广州中医药大学实验动物中心进行)。分组：清洁级SD大鼠24只,体重210±20g，雌雄各半，随机分为4组：空白(O)组，清毒片(Q)组，养正片(Y)组，化疗(H)组。方法参照中药血清药理相关文献[1]。

各组分别用相应药物灌胃3.5d，2次/d。用药如下：O组用生理盐水2ml，Q组用清毒片口服液2 ml(9g/kg)，Y组用养正片口服液2ml(10g/kg)，H组用阿糖胞苷1ml(17.85mg/kg)腹腔注射，1次/天，共用4次。于最后一次灌胃后1～2 h将大鼠用乙醚麻醉，毛细玻璃管双眼球后动脉取血2ml置抗凝管中。将样本3000rpm/min离心10min取血清1 ml，置56℃灭活30min，4℃冷藏备用。给药方法及剂量参照血清药理有关研究文献及实验动物用药剂量换算表[2?3]

2.2 细胞培养 人早幼粒白血病细胞株HL?60，用完全RPMI?1640培养液加10%胎牛血清培养，置37℃，5%CO2培养箱，3～5d换液1次，倒置显微镜观察，待细胞生长旺盛(达指数生长期)后进行下一步实验[4]。

2.3 含药血清处理细胞[1] 取生长良好的HL?60细胞，离心后弃上清，用RPMI?1640培养液稀释混匀，计数后按每孔200μl，密度5000/孔(细胞浓度为2.5×104/L)铺板，同步培养24h，每孔加入含各组含药血清的RPMI?1640培养液200μl，使含药血清的浓度为10%，每个浓度设3个复孔,刺激48 h后分别沉淀各组细胞，取上清液进行u?PA活性的ELISA检测。

2.4 细胞u?PA活性的ELISA测定(根据试剂盒说明书操作) 向96孔反应板中分别加入4