3讨论

乳腺癌

是一种全身性疾病，化疗在乳腺癌的治疗中占有重要地位. 然而肿瘤细胞对化疗药物的耐受是治疗失败的主要原因. Beurel等[4]证实，细胞对化疗药物敏感或耐受在一定程度上取决于凋亡相关基因的表达状态. Livin基因是凋亡抑制因子家族中的一个重要成员，其抗凋亡并对多种凋亡刺激剂具有抵抗作用[5-6]. 抑制Livin的表达有可能逆转肿瘤细胞耐药，可提高肿瘤细胞对化疗药物的敏感性.

RNA干扰是由双链RNA引发的转录后基因沉默，它与特异性mRNA的结合后导致靶基因的降解，高效特异的抑制细胞内基因的表达[7]. 在本实验中，我们构建了Livin siRNA真核表达载体，分别在mRNA和蛋白水平成功阻抑MDA?MB?231细胞中Livin的表达. 这说明选择的靶位点是有效的，通过RNA干扰技术可以有效的抑制Livin在乳腺癌细胞中的表达. 本研究结果显示，经si?Livin2下调Livin表达后，MDA?MB?231细胞的增殖受到明显的抑制;并且与未转染组和si?HK组相比，转染后细胞生长曲线低平，缺乏指数增殖特征. 进一步研究发现肿瘤细胞的细胞周期阻滞于G0/G1期，对阿霉素诱导凋亡敏感性明显增加，对阿霉素的IC50值显著降低. 这与前期的研究结果相似[8]，表明RNA干扰技术可以有效沉默Livin基因，由此在逆转肿瘤细胞耐药方面发挥重要作用. Livinα和β两个亚基各有一个BIR序列，Livin发挥抗凋亡的机制之一是通过BIR结构域与Caspase?3，7，9结合，抑制后者的活性，从而抑制细胞的凋亡[9]，Caspase?3激活是凋亡信号传导的关键. 本研究结果表明，Livin表达下调可造成Caspase?3的表达量随之升高，提示抑制Livin的表达可能激活Caspase?3依赖的凋亡信号传导通路，从而导致乳腺癌细胞对阿霉素诱导凋亡敏感性增高.

综上所述，本研究构建的靶向Livin的siRNA真核表达载体可以有效地抑制Livin基因的表达，并通过上调Caspase?3的表达从而抑制细胞增殖，显著提高乳腺癌细胞对阿霉素化疗的敏感性，为提高临床乳腺癌治疗效果奠定实验基础.

【参考文献】