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【摘要】 【目的】建立加味芍药甘草颗粒中芍药苷及甘草酸的含量测定方法。【方法】采用反相高效液相色谱法，色谱条件：乙腈(A)-10g/L冰醋酸水溶液(B)(调pH3?5)，流速1?0mL/min;检测波长250nm,柱温为室温，进样量20μL。梯度洗脱程序：体积分数18%A、0~5min，体积分数19%~29%A、6~10min，体积分数30%~45%A、11~25min(A+B=100%)。【结果】芍药苷及甘草酸分别在1?916～122?6、2?625～168μg/mL范围内成良好线性关系,平均回收率芍药苷为101?12%，甘草酸为99?68%。【结论】本测定方法简便可行、重复性好，可用于加味芍药甘草颗粒中有效成分芍药苷和甘草酸的含量测定。

【关键词】 加味芍药甘草颗粒/化学;芍药苷/分析;甘草酸/分析;色谱法，高压液相

芍药甘草汤系《伤寒论》著名方剂，由芍药、甘草等份组成。该方为仲景为伤寒误汗亡阳、阳复后脚挛急证而设，奏柔肝舒筋、缓急止痛之效，具有明显的镇痛、抗炎、解痉、止咳、平喘、抗变态反应作用，广泛应用于呼吸系统、消化系统、神经肌肉系统、泌尿系统及外科和妇科等方面的疾病[1]。研究表明，芍药苷及甘草酸为芍药与甘草中的主要有效成分[2-3]。而以芍药、甘草为主的衍化方较多，该类制剂的指标成分主要是芍药苷、甘草酸，有关单独测定这两类成分方法的文献报道较多，目前尚未见到同时测定芍药甘草汤颗粒中芍药苷与甘草酸含量的报道。加味芍药甘草颗粒是以芍药甘草汤为基本方的中成药，本文采用高效液相色谱法(HPLC)同时检测该方中芍药苷和甘草酸的含量，结果报道如下。

1 仪器与试药

1?1仪器Summit P680A型高效液相色谱仪、 Summit P680A型低压四元泵、PDA?100 ASI100自动进样器、Summit 柱温箱以及“变色龙”色谱工作站均由德国戴安中国有限公司提供;Sartorius十万分之一电子天平由德国赛多利斯公司提供。

1?2 药物与试剂加味芍药甘草汤颗粒(批号分别为20070217、20070520、20071023)购自天津泰达药业有限公司;芍药苷和甘草酸对照品均购于中国药品生物制品检定所(批号分别为110736?200629、110731?200408);乙腈为色谱纯;冰醋酸为分析纯。

2方法和结果

2?1色谱条件色谱柱：Diamonsil C18(4?6mm×250mm，5μm);流动相：乙腈(A)-10g/L冰醋酸水溶液(B)(调pH 3?5);流速为1?0mL/min;检测波长为250nm;柱温为室温;进样量20μL。梯度洗脱程序：体积分数 18%A、DISEASE MODELS, ANIMAL; RATS0~5min，体积分数19%～29%A、6～10min，体积分数30%～45%A、11～25min(A+B=100%)。在此条件下芍药苷、甘草酸与其他组分能达到较好分离，分离度均大于1?5，理论塔板数均大于5 000(见图1～4)。

2?2标准品溶液的制备及线性关系的考察精密称取芍药苷对照品12?26mg置10mL量瓶中，用体积分数35%乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀，配制成质量浓度为1?226mg/mL的芍药苷对照品贮备液;精密称取甘草酸对照品8?4mg置25mL量瓶中，用体积分数35%乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀，配制成质量浓度为0?336mg/mL的甘草酸对照品贮备液。精密量取芍药苷对照品贮备液1?0mL、甘草酸对照品贮备液5?0mL置10mL量瓶中，用体积分数35%乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀，配制成含芍药苷、甘草酸质量浓度分别为0?1226、0?168mg/mL的混合对照品溶液，作为线性1号工作液。

2?3供试品溶液的制备精密称取加味芍药甘草颗粒粉末1?0g。置100mL具塞三角瓶中，精密加入甲醇25?0mL，密塞，称定质量，超声提取30min，室温放置30min后，以甲醇补足损失的质量，摇匀，滤过;精密量取续滤液1?0mL置10mL量瓶中用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。

2?4阴性对照品溶液的制备阴性对照溶液的制备按照2?2项下方法分别制备缺白芍、缺甘草的加味芍药甘草颗粒阴性样品。

2?5精密度试验取对照品溶液重复进样6次，每次20μL。测得芍药苷、甘草酸峰面积sR分别为0?93%、0?75%。

2?6稳定性试验精密吸取供试品溶液20μL，重复进样6次，每次间隔2h，测得芍药苷、甘草酸峰面积sR分别为0?55%、0?62%，结果表明样品中芍药苷、甘草酸在12h内稳定。