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【摘要】 【目的】观察复方茯苓甘草汤对肺动脉高压(PAH)大鼠肺动脉转化生长因子?β1(TGF?β1)表达的影响，以探讨该方防治肺动脉高压、肺血管重构的作用机理。【方法】选用30只SD雄性大鼠随机分为正常对照组、模型组、复方茯苓甘草汤治疗组(中药组，剂量为5?46g·kg-1·d-1);腹腔内一次性注射野百合碱(剂量为50mg/kg)造模，采用右心导管法检测大鼠平均肺动脉压(pmPA);计算右心肥厚指数(p右心肥厚);采用病理图像分析系统计量肺小动脉形态学指标，免疫组化法观察肺动脉中TGF?β1的表达。【结果】模型组大鼠pmPA、p右心肥厚显著升高，肌型动脉及部分肌型动脉比例增多，肌型动脉中膜面积与管腔面积比值(AM/AL)增大，肺动脉TGF?β1表达明显增多;复方茯苓甘草汤组上述各指标均有显著改善。【结论】复方茯苓甘草汤可有效降低肺动脉压、改善肺血管重构，其机理可能与抑制肺动脉TGF?β1的表达有关。

【关键词】 复方茯苓甘草汤/药理学;肺动脉高压/中药疗法;肺血管构型重建/中药疗法;肺组织/病理学;转化生长因子β;疾病模型，动物;大鼠

肺动脉高压(PAH)是临床众多心肺血管疾病发生发展的重要病理生理环节，在肺心病的发展过程中起着重要作用，长期肺动脉高压可致右心肥厚甚或功能衰竭。肺血管构型重建(PVSR)以肺血管壁细胞增殖，细胞外基质(ECM)合成增多，腺泡内无肌型动脉肌化、管壁增厚、管腔狭窄为主要特征，是造成肺血管阻力持续升高和肺动脉高压发生发展的主要原因[1-2]。转化生长因子?β(TGF?β)是一组多功能的多肽类生长因子，对细胞的增殖与分化、细胞外基质的产生、血管的生成、细胞凋亡及机体免疫系统均起着重要的调节作用[3]。我们既往的实验[4]表明复方茯苓甘草汤能降低肺动脉压，但机制仍不甚明了。本文观察了复方茯苓甘草汤对PAH大鼠肺动脉TGF?β1表达的影响，以探讨该方防治PAH、PVSR的作用机理，现报道如下。

1材料与方法

1?1药物复方茯苓甘草汤(茯苓、桂枝、炙甘草、桃仁、川贝母等)药材均购于广东医学院附属医院中药房，按组方比例称取，常规煎煮后配制成含生药546g/L药液。

1?2主要仪器及试剂Leiea Q500IW图像分析系统(德国Leica公司);Medlab?E生物信号采集处理系统(南京美易科技有限公司);野百合碱(MCT，美国Sigma公司);TGF?β1多克隆抗体(北京天来生物医学科技有限公司);免疫组化试剂盒(北京中杉金桥生物技术有限公司)。

1?3实验动物及分组SPF级Sprague?Dawley系健康雄性大鼠30只，体质量(260±20)g，由广东医学院实验动物中心提供，合格证号：粤监证字2007A034。随机分为正常对照组(不造模，第2天开始给予生理盐水10mL/kg灌胃，每天1次，连续21d)、模型组(造模后第2天开始给予生理盐水10mL/kg灌胃，每天1次，连续21d)及复方茯苓甘草汤治疗组(中药组，造模后第2天开始给予中药5?46g·kg-1·d-1灌胃，连续21d)。

1?4肺动脉高压模型复制[5]MCT用乙醇和生理盐水(体积比为2∶8)混合液配成10mg/L溶液，按50mg/kg腹腔内一次性注射。正常对照组注射等容积生理盐水代替MCT。

1?5肺动脉压力及右心肥厚指数测定[6]借助右心导管与Medlab?E生物信号系统测量平均肺动脉压(pmPA);取出心脏，剪除心房及血管，分离左、右心室及室间隔，冰盐水冼净及滤纸吸干后分别称量右心室自由壁质量(mRV)和左心室加室间隔质量(mLV+S)，计算右心肥厚指数p右心肥厚=mRV/mLV+S。

1?6肺血管形态学指标的观测剪取完整右肺上叶，冰盐水洗净，除去血液，滤纸吸干，体积分数为10%中性甲醛溶液固定24h，常规梯度脱水、浸蜡、包埋、5μm连续切片、烤干，行苏木素—伊红(HE)及弹性纤维染色。显微镜下观察并计数整张切片中直径约30~200μm的肺血管肌型动脉(MA)、部分肌型动脉(PMA)、无肌型动脉(NMA)的数目，分别计算它们各占肺血管总数的百分比;每张切片随机选直径约30~200μm范围的肌型动脉各6支，用Leica Qwin图像分析系统测定中膜面积(AM，内外弹力层之间包围的面积)、管腔面积(AL，内弹力层包围面积)，计算中膜面积与管腔面积的比值(AM/AL)。

1?7免疫组织化学检测参照试剂盒说明进行操作。肺动脉中TGF?β1表达的阳性信号为棕黄色沉淀。光镜下，每只大鼠选择血管外径为100μm左右的肺动脉进行半定量积分分析[7-8]。根据每条肺动脉中阳性信号表达的百分比，将其蛋白表达分为3个等级：(-)无表达;(+)1%~50%表达;(++)51%~100%表达。肺动脉中TGF?β1的表达进一步用积分值表示，即以某一反应强度的肺动脉的百分比乘以反应强度的加权值(“-”、“+”、“++”表达强度加权值分别为0、0?5、1?0)，每份标本至少检测10条血管。

1?8统计学方法应用SPSS 13?0统计软件进行统计分析。

2结果

2?1各组大鼠平均肺动脉压及右心肥厚指数的变化表1结果显示，模型组pmPA、p右心肥厚均显著升高(P<0?01)，中药组两指标与模型组比较均显著下降(P<0?01)。各组大鼠肺动脉压力波形见图1。

2?2各组大鼠肺小动脉病理形态观察图2(彩图页第102页)结果显示，正常对照组大鼠肺小动脉管壁菲薄;模型组大鼠肺小动脉管壁增厚，管腔狭窄;中药组肺小动脉管壁厚度及血管腔狭窄程度显著减轻。图3(彩图页第102页)结果显示，正常对照组大鼠肺小动脉管壁内、外弹力板间距离正常，中膜较薄;模型组大鼠肺小动脉内、外弹力板间距离明显增宽，管壁增厚，管腔狭窄;中药组则显著减轻。

2?3各组大鼠肺组织MA、PMA、NMA所占比例的变化表2结果显示，模型组pMA、pPMA显著升高，pNMA显著降低(均P<0?01);中药组pMA、pPMA下降(P<0?01)，pNMA显著升高(P<0?01)。