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浅谈高效液相色谱法测定桃仁红花配伍药对中羟基红花黄色素A含量的变化

作者：张荣，王涛，刘启德，陈少洁

【摘要】 【目的】 观察桃仁红花不同配伍比例(质量比分别为1∶1、1∶2、1∶3)在水煎液环境中对羟基红花黄色素A(HSYA)含量的影响。【方法】采用反相高效液相色谱(RP?HPLC)法，色谱柱为Luna C18柱(4?6 mm×150 mm，5 μm)，以甲醇?0?12 mmol/L磷酸水溶液(28∶72)为流动相，检测波长403 nm，流速1?0 mL/min，柱温30℃。【结果】 HSYA在4?0～160?0 μg/mL 浓度范围内线性关系良好，其回归方程Y=25 396X+40 247(r=0?999 7)，平均加样回收率为94?76%，相对标准偏差(sR)为2?93%。HSYA含量基本随着红花用量比例的增加而呈相应倍数递增，与桃仁用量无明显关系。【结论】本研究建立的HSYA含量测定方法简便准确，重复性好，可用于红花药材及其复方制剂质量标准的控制，桃仁对HSYA的溶出无明显影响。

【关键词】 桃仁/化学;红花/化学;羟基红花黄色素A/分析;色谱法，高压液相

菊科植物红花(Carthamus tinctorius L.)是新兴的油料作物，其干燥的管状花称为红花(也叫草红花、红花绒、红花丝等)，是传统的活血化瘀中药。现代药理学研究表明红花具有抗凝血、抗血栓、降血压、降血脂等功效，在治疗脑血栓、脑溢血、冠心病、高血压等心脑血管疾病方面疗效显著[1-2]。桃仁为蔷薇植物桃Prunus persica(L?)batsch的种子,其性平味甘苦,具有活血祛瘀、润肠通便之功，常用于经闭、痛经、癥瘕痞块、跌打损伤、肠燥便秘等症。桃仁红花配伍是中药方剂应用中的常见药对之一，经考察中药复方2 477种药方，两者配比关系为1∶1者占56?9%，1∶2者占11?8%，2∶3者占13?7%,其他占17?6%[3-4]。红花中查耳酮苷类化合物—羟基红花黄色素A(hydroxysafflor yellow A, HSYA)是中国药典规定的红花药材指标，也是红花药理功效的最有效水溶性成分,可抑制血小板激活因子诱发的血小板聚集与释放，为一种血小板激活因子受体拮抗剂[5]。本实验采用反相高效液相色谱(RP?HPLC)法，考察桃仁红花不同配伍比例中HSYA含量的变化，现将结果报道如下。

1仪器与试药

515 高效液相色谱仪(美国Waters公司，2487 紫外监测器，N3000色谱工作站);AE240电子天平(瑞士梅特勒—托利多仪器有限公司);HSYA对照品(中国药品生物制品检定所，批号：111637?200502);甲醇(色谱纯，Burdick&Jackson公司);红花、桃仁药材于2008年购自广州中医药大学大药房有限公司，经鉴定红花为菊科植物红花Carthamus tinctorius L.的干燥花，桃仁为蔷薇科植物桃Prunus persica(L.)Batsch的干燥成熟种子;磷酸等其他试剂均为市售分析纯(广州化学试剂公司)。

2方法与结果

2?1色谱条件色谱柱为Luna C18柱(150 mm×4?6 mm，5 μm);流动相为甲醇—0?12 mmol/L磷酸水溶液 (体积比28∶72);流速1?0 mL/min;检测波长403 nm;柱温30℃;进样量5μL。

2?2对照品贮备液的配制精密称取HSYA标准对照品2?00 mg于10?0 mL棕色容量瓶中，加蒸馏水溶解并稀释至刻度，摇匀，即得0?20 mg/mL的HSYA标准储备液，置4℃冰箱避光保存。临用前用蒸馏水稀释到所需浓度。

2?3供试品溶液的制备[6]分别精密称取桃仁—红花(质量比 1∶1)0?2 g，桃仁—红花(质量比 1∶2)0?3 g，桃仁—红花(质量比 1∶3)0?4 g，分别置于50 mL圆底烧瓶中，精密加入12 mL蒸馏水，回流加热提取40 min，稍冷后过滤于25 mL容量瓶中，加蒸馏水稀释至刻度，摇匀，0?45 μm微孔滤膜过滤，取续滤液5 μL进样检测分析。

2?4阴性样品液的制备取桃仁药材约0?1 g，按2?3项下方法制成桃仁单煎阴性样品液。

2?5系统适用性试验精密吸取对照品溶液、供试品溶液及阴性样品液各5 μL，在上述选定的色谱条件下分别进样测定，HPLC色谱图见图1。结果HSYA的保留时间约在12?5 min，峰分离度良好，阴性样品液无干扰。

2?6标准曲线的制备精密吸取HSYA对照品储备液0?1、0?25、0?5、1?0、2?0、4?0 mL,分别置于5 mL棕色容量瓶中，加蒸馏水稀释至刻度，摇匀。各精密吸取5 μL注入液相色谱仪中，按照上述选定色谱条件测定，以色谱峰面积为纵坐标，HSYA浓度为横坐标进行线性回归，其回归方程为Y=25 396X+40 247，r=0?999 7，HSYA在4?0～160?0 μg/mL的浓度范围内线性关系良好。