1?6Flowcytomix流式检测将待检样品从-20℃冰箱中取出，置于37℃复苏30 min;按流式微球阵列检测试剂盒操作说明准备好分析缓冲液、标准品、微球、生物素偶联剂及亲和素标记藻红蛋白(phycoerythrin，PE)，以每孔50 μL分析缓冲液预湿96孔微孔板，在标准曲线孔加25 μL相应浓度的标准品;空白孔加25 μL分析缓冲液，样本孔加25 μL待测标本。同时每孔加入25 μL混合的微球和50 μL生物素偶联剂，封板膜封板，避光室温孵育2 h;真空抽干，每孔加入100 μL检测缓冲液，充分洗涤2次，加入100 μL检测缓冲液和50 μL亲和素标记PE，继续孵育1 h;真空吸干，每孔加100 μL检测缓冲液，充分洗涤2次;加入200 μL检

测缓冲液，反复吹打后，加入300 μL检测缓冲液并转移到流式上样管。上机收集标本时，保证低或中流速，避免频繁转换流速，以防造成微球的偏移。按照标准孔1~7、空白孔、样本孔的顺序收取标本数据。

FACSCalibur 流式细胞仪测定荧光强度，使用PE阳性和阴性对照微球设定仪器参数(电压和补偿)。检测前向散射光(FSC)、侧向散射光(SSC)时，需要调节不同荧光通道FL2 和 FL3(690 nm)的参数。流式分析时，先建立 FSC/SSC(FSC为X轴，SSC为Y轴)双参数直方图及FL2/FL3(FL2为X轴，FL3为Y轴)双参数直方图。

1?7数据分析及统计学方法实验复孔独立重复1次，将标准品和待检品捕获数据转入Flowcytomix Pro分析软件，建立各细胞因子荧光值与其实际浓度的标准曲线，各待测样本细胞因子浓度根据其荧光值由标准曲线自动读出。采用SPSS 13?0 统计软件进行分析。

2结果

2?1死亡情况干预治疗6周后空白对照组MRL/lpr狼疮鼠因发病较早死亡1只。

2?2参数调节结果见图1(彩图页第427页)。调节 FSC 和 SSC 的参数后(采用线性模式)，R1(IL?1α、 IL?2、 IL?5 、IL?6、IL?10)和R2(IFN?γ、TNF?α 、GM?CSF、IL?4、IL?17)微球出现在 FSC/SSC 直方图内(图1-a);调节 FL2 和FL3的参数后(采用对数模式)，R1(红色)和R2(绿色)的微球出现在 FL2/FL3 直方图内(且需要使微球位于图中的左边界)。其中5群红点分别表示5种细胞因子(图1-b)，5群绿点分别表示另5种细胞因子(图1-c)。

2?3各组小鼠血清Th1型细胞因子检测结果表1结果显示，中西结合组GM?CSF水平较空白对照组低，差异有显著性意义(P<0?05)，其他治疗组GM?CSF水平与空白对照组比较差异无显著性意义(P>0?05);各治疗组IFN?γ、TNF?α水平均低于空白对照组，差异有显著性意义(P<0?05或P<0?01)，且中西结合组IFN?γ、TNF?α水平均较中药组和西药组低，差异有显著性意义(P<0?05或 P<0?01);各治疗组IL?2水平均高于空白对照组，差异有显著性意义(P<0?05或P<0?01)，但3组间比较差异无显著性意义(P>0?05);各治疗组IL?17水平均低于空白对照组，差异有显著性意义(P<0?05或P<0?01)，但3组间比较差异无显著性意义(P>0?05)。

2?4各组小鼠血清Th2型细胞因子检测结果表2结果显示，各治疗组IL?4、IL?5、IL?10水平均低于空白对照组，差异有显著性意义(P<0?05或P<0?01)，且中西结合组IL?10水平均较中药组和西药组低(P<0?05或P<0?01);西药组和中西结合组IL?6水平均低于空白对照组，差异有显著性意义(P<0?01)，且中西结合组IL?6水平显著低于西药组(P<0?05)。表1各组小鼠血清Th1型细胞因子检测结果比较表2各组小鼠血清Th2型细胞因子检测结果比较

3讨论