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2012-12-07
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浅谈狼疮Ⅱ号对缺乏淋巴增殖基因狼疮鼠Th1/Th2细胞因子谱的影响
作者:吴元胜,欧阳杰,禤国维,梁德洪
【摘要】 【目的】探讨中药狼疮Ⅱ号对缺乏淋巴增殖基因(MRL/lpr)狼疮鼠Th1/Th2相关细胞因子谱的影响。【方法】选用自发性系统性红斑狼疮(SLE)模型MRL/lpr狼疮鼠40只,随机分为空白对照组、狼疮Ⅱ号组(中药组,剂量为20 g·kg-1·d-1)、强的松组(西药组,剂量为6 mg·kg-1·d-1)、中西结合组(20 g·kg-1·d-1狼疮Ⅱ号+6 mg·kg-1·d-1强的松);连续用药8周后,采用Flowcytomix流式检测技术对血清中多种Th1/Th2细胞因子进行芯片式集成测定。【结果】与空白对照组比较,中西结合组粒细胞—巨噬细胞集落刺激因子(GM?CSF)水平显著降低(P<0?05);各治疗组干扰素?γ(IFN?γ)、肿瘤坏死因子?α(TNF?α)水平显著降低,且中西结合组两因子水平显著低于单纯中药组及西药组(P<0?05或P<0?01);各治疗组白介素?2(IL?2)水平显著升高,IL?17水平显著降低(P<0?05或P<0?01),但3组间比较差异无显著性意义(P>0?05);各治疗组IL?4、IL?5、IL?10水平显著降低,且中西结合组IL?10水平显著低于单纯中药组和西药组(P<0?05或P<0?01);西药组和中西结合组IL?6水平显著降低(P<0?01),且中西结合组IL?6水平显著低于西药组(P<0?05)。【结论】狼疮Ⅱ号可能通过调节Th1/Th2细胞因子网络的平衡,影响B细胞、T细胞过度活化而发挥治疗SLE的作用。
【关键词】 狼疮Ⅱ号/药理学;系统性红斑狼疮/中药疗法;细胞因子;疾病模型,动物;小鼠
系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)是自身免疫病的原型代表,B细胞高度活化是其发病中最为关键的因素之一。B细胞异常活化、增殖和分化,导致B细胞多克隆激活,产生多种自身抗体,损伤自身组织和器官[1]。近年来,随着对细胞因子的深入研究,发现B细胞的活化受多种T细胞亚群及多种细胞因子尤其是白介素的调节,B细胞活化、增殖、分化的每一阶段都需要细胞因子的参与,细胞因子网络在B细胞过度活化和抗体产生中起着重要作用[1-3]。Th1/Th2细胞因子平衡代表着机体复杂的细胞因子网络,调整这个网络的平衡在SLE的治疗中具有一定的临床应用潜力。
缺乏淋巴增殖基因(MRL/lpr)狼疮鼠是一种较好的自发性SLE动物模型,其发病后症状与人类红斑狼疮相似,包括显著的血清自身抗体的出现、免疫复合物肾小球肾炎、血管炎等,对探讨SLE的发病机制、病理变化和治疗具有重要意义[4-7]。狼疮Ⅱ号是在经典名方六味地黄丸的基础上研制的改良验方,具有滋阴清热、凉血解毒的作用。本研究在前期运用该方治疗活动性SLE患者获得了较为肯定的临床疗效基础上[8-10],采用基于微球技术的液相蛋白流式检测——Flowcytomix技术,探讨狼疮Ⅱ号对MRL/lpr狼疮鼠外周血Th1/Th2相关细胞因子谱的影响,现将结果报道如下。
1材料和方法
1?1实验动物缺乏lymphoproliferation(lpr,淋巴增殖)基因(MRL/lpr)小鼠购自中国科学院上海实验动物中心,合格证号:SCXK(沪)2007?0005,雌性,12周龄,体质量(25?2±2?8)g,饲养在广东省医学实验动物中心无特定病原体(SPF)级实验动物室层流柜,室内保持(25±1)℃,自由饮水、进食,采用12 h ∶12 h昼夜间断照明,每周换水3次,换垫料2次,SPF级饲料产自广东省医学实验动物中心。
1?2药物中药复方狼疮Ⅱ号由广州中医药大学第二附属医院制剂科提供,该方由山萸肉、生地、茯苓、泽泻、牡丹皮、青蒿、甘草等组成,先后加蒸馏水1 000 mL和500 mL,煮沸2 h和1?5 h,合并2次药液,过滤,旋转蒸发浓缩,制成含生药浓度200、400 mg/mL两种浓度的水煎剂,高压灭菌后备用;强的松(醋酸泼尼松片)由广东三才医药集团有限公司生产(批号:44023869)。
1?3主要试剂和仪器粒细胞—巨噬细胞集落刺激因子(GM?CSF)、干扰素?γ(IFN?γ)、白介素?1α(IL?1α)、白介素?2(IL?2)、白介素?4(IL?4)、白介素?5(IL?5)、白介素?6(IL?6)、白介素?10(IL?10)、白介素?17(IL?17)、肿瘤坏死因子?α(TNF?α)的mouse Th1/Th2 Flowcytomix可溶性细胞因子检测试剂盒(由奥地利Bender Medsystems公司提供); FACSCalibur 流式细胞分选仪(美国BD公司);MAVM 0960R密理博真空抽滤装置(美国Millipore 公司);Flowcytomix Pro Software 2?1检测软件(由奥地利Bender Medsystems公司提供)。
1?4动物分组与治疗方法40只小鼠随机分为4组,每组10只,分别为空白对照组,予以生理盐水灌胃;中药组,予以狼疮Ⅱ号20 g·kg-1·d-1剂量灌胃(人等效剂量的2倍);西药组,予以强的松混悬液6 mg·kg-1·d-1剂量灌胃;中西结合组,予以狼疮Ⅱ号20 g·kg-1·d-1加强的松混悬液6 mg·kg-1·d-1剂量灌胃。各组灌胃给药容积20 mL/kg,西药组、中西结合组分别给予各药的生理盐水混悬液。
1?5观察指标及标本处理从13周龄起,上述各组饲养、用药8周,末次给药24 h后的上午9∶00时至10∶00时同批各鼠眶后静脉丛采血,置于具有肝素的试管中,离心,取血清置-20℃保存。
标签:医药卫生
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